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多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理,选用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗抗体,对试剂盒中的荧光染料进行活化,将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记,通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×) (Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution(40×))采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA,结合了两者修复抗原的优点,并经过适当优化,可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。适用于石蜡切片、冰冻切片等样品。
Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。
EDTA抗原修复液(50×)(EDTA Antigen Retrieval Solution (50×))采用了广泛使用的EDTA,可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
Western一抗二抗去除液(弱碱性)使用辣根过氧化物酶标记的抗体时,封闭液必须使用5%脱脂奶粉配制。使用碱性磷酸酯酶标记的抗体时,封闭液必须使用酪蛋白(casein)配制。
Western一抗二抗去除液(中性)又称膜再生液或Western抗体洗脱液(Stripping buffer),用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测GAPDH、β-actin等表达量相对稳定的管家蛋白或其它蛋白作为参照。
免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA 和YI肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。
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