改进型NP-40裂解液（带有抑制剂）

描述

• NP-40裂解液（NP-40 Lysis Buffer）是一种比较温和的细胞组织裂解液，其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

产品组分

• NP-40裂解液：100ml，1瓶

• 磷酸酶抑制剂：1ml，2瓶

• PMSF：1ml，1瓶

使用方法

• 试剂准备：融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内将蛋白酶抑制剂复合物或磷酸酶抑制剂复合按照1:50加入裂解液中，或者使用100mM的PMSF，并使PMSF的最终浓度为1mM。

• 细胞/组织的裂解：

• 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 对于组织样品：用剪将组织们剪成碎片后，按照每20mg组织加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液，并使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 蛋白样品收集：充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

注意事项

• 为取得最佳的使用效果，可以适当分装后-20°C保存使用，避免过多的反复冻融；

• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或2～8°C进行；

• 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

储存/保存方法

• 裂解液保存于2～8°C，其他保存于-20°C，有效期12个月。