Protein A琼脂糖磁珠

描述

• 本产品是一款以重组Staphylococcus aureus蛋白A为配基的抗体亲和琼脂糖磁珠，对人、小鼠、大鼠、兔、牛等来源的多种类型和亚型的抗体有亲和作用。可从腹水、血清、细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。本产品也较多用于免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）和共免疫沉淀（Co-IP）。

• 琼脂糖磁珠产品多用于小规模纯化与富集（微克到百毫克级），也用于免疫沉淀、pull-down实验等场景。与琼脂糖凝胶填料的柱层析操作相比，利用琼脂糖磁珠进行亲和纯化除了保留柱层析高容量、高纯度、高收率、高重现性等特点外，还有以下特点和优势：

• 料液的澄清化要求低，可缩短纯化时间，对低表达量料液的富集效果更好；

• 可进行手动或者自动化的批量操作，手动操作不依赖于设备，操作通量高。

产品规格

• abs9904-1mL：1 mL纯磁珠（产品形态为5mL悬液）

• abs9904-5mL：5 mL纯磁珠（产品形态为25mL悬液）

产品用途

• 用于抗体纯化，抗体磁珠表面共价偶联Protein A；适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。

技术指标

• 产品名称：Protein A琼脂糖磁珠

• 基质：顺磁性琼脂糖微球

• 配基：重组Staphylococcus aureus蛋白A，大于等于6 mg/mL纯磁珠

• 粒径范围：30~100 μm

• 结合能力：大于等于40 mg h-IgG/mL纯磁珠

• pH稳定性：3~10（推荐的工作pH），2~12（短期稳定）

• 化学稳定性：常用的水相缓冲液、0.1%非离子型去污剂（如Triton X-100）、70%乙醇等

储存/保存方法

• 本产品为磁珠悬液，含20%纯磁珠，另含20%乙醇作为保存液，保存温度2~8℃，不可冻存，有效期2年。

运输方式

• 蓝冰运输

使用方法

• 一、缓冲液准备：

• 亲和纯化过程常用的缓冲液为结合缓冲液（Binding buffer）和洗脱缓冲液（Elution buffer）。结合缓冲液用于维持目标分子（如蛋白质）与其特异性配体（固定在填料上的分子）之间高特异性和高亲和力的结合。相应地，洗脱缓冲液通过破坏目标分子与其特异性配体之间的生物特异性相互作用来洗脱目标分子。

• Protein A琼脂糖磁珠常用的缓冲液如下。结合缓冲液：20 mM PB，150 mM NaCl，pH 6.8~7.4。有时也选择不添加NaCl。洗脱缓冲液：0.1 M Glycine，pH 3.0。对于不同类型的IgG，洗脱pH会有差异，常用的洗脱方式利用为pH=3的Glycine、柠檬酸盐或乙酸盐缓冲液。有时需要将pH降低至2.5才能洗脱，但在低pH条件可能会使一些抗体失活或聚集，可每毫升洗脱液中加入100 μL的1 M Tris-HCl（pH 8.0~9.0）以中和洗脱组分。

• 二、样品准备：

• 上样前，检查样本的pH值，必要时进行调整。样本的pH值应与结合缓冲液的pH值尽可能相同。总体而言，磁珠纯化对样品的澄清度要求比柱层析低。如果样本中的颗粒物质（如细胞、碎片、聚集体）不会增加非特异性结合，则无需对样品进行澄清化处理。澄清化的处理方式通常为离心和/或过滤，可采用0.45微米孔径的滤膜过滤，或者进行高速离心（例如，在4℃下以大于等于10000×g离心15-30分钟）。

• 三、磁珠准备：

• 磁珠量取：原包装是20%的磁珠悬液，可充分混匀后立即用移液枪按体积量取磁珠，每次量取均要重新混匀。最小50 μL悬液（含10 μL磁珠）即可进行一次纯化。通常将磁珠转移至0.2~50 mL规格的离心管中使用。

• 磁力架与磁性分离：手动操作时，利用磁珠纯化所需的主要器材涉及离心管和磁力架。磁性微球可在短时间内被吸至磁力架含磁铁的一侧，其余溶液则变澄清，实现固液磁性分离，通过移液枪可方便移去清液。利用磁珠纯化时，磁珠用量、料液体积与离心管规格的匹配程度比较关键。以2 mL的离心管为例，磁珠的量控制在10~100 μL纯磁珠，样品料液的量控制在0.3~1.5 mL（离心管容积的15%~75%），料液与磁珠的体积比在15~50之间比较合适，若目标蛋白表达量很低，该体积比可扩大。

• 去除保存液：原磁珠保存液含20%乙醇，使用前需要去除。量取磁珠后，加入离心管，在磁力架中使磁珠分离，用移液枪取出清液。再向离心管中加入10~50个磁珠体积的超纯水或者平衡缓冲液，盖紧盖子，手动震荡或者旋匀仪混合10~30秒使磁珠颗粒再分散，置于磁力架中，移去清液以除去保存液，重复操作2~3次。

• 四、抗体纯化过程（以250 μL磁珠悬液含50 μL磁珠和2 mL离心管为例）：

• 平衡（Equilibration）：取250 μL磁珠悬液（含50 μL纯磁珠）加入新的2 mL离心管中。将离心管置于磁力架中，磁性分离，小心移除上清液（即含有20%乙醇的保存液）。加入500 μL结合缓冲液，在无磁场的条件下再分散磁珠（手动震荡或者旋匀仪混合10~30秒），将离心管置于在磁力架中，磁性分离后用移液枪移去平衡液。平衡过程可进行1~2次。

• 孵育（Incubation）：在上述移去平衡液后，往离心管里加入1.5 mL样品料液，开始孵育。孵育过程中，磁珠颗粒需要保持均匀分散，可在旋匀仪或者台式摇床中进行。孵育通常在室温条件下进行，孵育时间在30~60 min为宜，一些特殊样品也可以在4℃的低温条件下孵育过夜。如果料液/磁珠体积比过大或者料液浓度过低，孵育时间可适当延长。料液可以不进行澄清处理，但需要保证在下述的淋洗过程中将颗粒物杂质除掉。通常情况下需要保留少量的料液以备SDS-PAGE等检测操作。孵育结束后将离心管置于磁力架上进行磁性分离，移出上清液到新的离心管中以备后续检测。上样量可按“mg目标蛋白/mL磁珠"来设定，可设定为磁珠结合量的50~80%，例如本产品对h-IgG的结合量大于40 mg/mL，上样量可控制在20~32 mg/mL。

• 洗杂（Wash）：往离心管加入500 μL结合缓冲液，盖紧盖子，手动震荡或者旋匀仪混合10~30秒使磁珠颗粒再分散。将离心管置于磁力架上，磁性分离，移去上清液（需取样检测可收集）。洗杂过程可进行1~2次，每次淋洗操作耗时2 min左右。

• 洗脱（Elution）：往离心管中加入5~10体积的洗脱缓冲液，即250~500 μL，盖紧盖子，手动震荡或者旋匀仪混合10~30秒使磁珠颗粒再分散。将离心管置于磁力架上进行磁性分离，收集洗脱液。洗脱过程可进行2~4次，分管收集，合并浓度较高的收集管。如果认为洗脱过程需要孵育，孵育时间控制在10 min为宜。

• 再生（Regeneration）：磁珠通常一次性使用可确保性能最佳。针对同一样品（避免交叉污染），磁珠经再生后可以重复使用3~5次。从磁力架上取下离心管，加入500 μL结合缓冲液，盖紧盖子，手动震荡或者旋匀仪混合10~30秒使磁珠颗粒再分散，将离心管置于磁力架上，进行磁性分离，移去上清液，再生过程进行2次。再生后的磁珠可进行下一次纯化或者保存。对于本产品，不建议采用变性剂、去污剂进行清洗。可用500 μL的10~100 mM NaOH清洗，接触时间10分钟，清洗1次。若磁珠性能下降，则采用新磁珠。

• 保存（Storage）：磁珠的初始保存液为20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~8℃为宜，不可冻存。