RIPA裂解液（弱）

描述

• RIPA裂解液（弱），即RIPA Lysis Buffer (Weak)，是一种温和裂解细胞，可用于从细胞、组织中制备非变性蛋白裂解物。可以用于Western Blot、IP、Co-IP、ELISA等实验。

产品组成

• RIPA裂解液（弱）：100mL，2~8℃储存

应用

• 可以用于Western Blot、IP、Co-IP、ELISA等实验。

产品用途

• 裂解最温和，能很大程度保持蛋白的天然构象和相互作用，裂解得到的蛋白溶液适用于免疫共沉淀（Co-IP）、激酶活性测定、细胞因子或生长因子检测、染色质免疫沉淀（ChIP）前的细胞裂解。

使用方法

• 一、贴壁培养细胞：

• 取RIPA Lysis Buffer加入蛋白酶抑制剂或/和磷酸酶抑制剂；

• 去除贴壁细胞的培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗1次，刮刀刮取细胞，低速离心，弃上清，留取沉淀；

• 按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例，加入RIPA裂解液。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解10-15 min，可以使细胞充分被裂解；

• 10000-12000g，4℃离心10-15 min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清；

• 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 二、悬浮培养细胞：

• 取RIPA Lysis Buffer加入蛋白酶抑制剂或/和磷酸酶抑制剂；

• 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀；

• 按照6孔板每孔细胞加入100-200μL裂解液的比例，加入RIPA裂解液，充分裂解；

• 10000-12000g，4℃离心10-15 min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清；

• 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 三、组织样本：

• 取RIPA Lysis Buffer加入蛋白酶抑制剂或/和磷酸酶抑制剂；

• 把组织分别剪切成细小的碎片，越小越好；

• 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。使用匀浆仪或者研磨仪充分研磨组织后获得组织匀浆，再置于冰上或4℃裂解15-30 min；

• 充分裂解后，10000-14000g，4℃离心15-20 min，取上清；

• 即可进行后续的Western和免疫共沉淀等操作。

• 注意：裂解产物的过程中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。

注意事项

• 去除贴壁细胞的培养液时，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗；

• 如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量；

• 如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞由于和裂解液接触不充分较难裂解充分；而常量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分；

• 使用RIPA裂解液时，应尽量缩短处于室温温度的时间，避免裂解液中的有效成分失效；

• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4ºC进行；

• 需要自行订购蛋白酶抑制剂或/和磷酸酶抑制剂；

• 仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内；

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存/保存方法

• 2-8℃贮存，有效期12个月。

运输方式

• 蓝冰运输