SDS裂解液

描述

• SDS细胞裂解液由SDS、Tris-HCl等组成，本试剂未加入蛋白酶抑制剂成分，请依据文献要求自行添加。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳、Western、免疫沉淀（Immunol Precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）等。不宜用Bradford法测定由SDS细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。

产品组成

• A：SDS Lysis Buffer，100mL，-20℃保存

• B：PMSF（100mM），1.5mL，-20℃保存

使用方法

• 一、贴壁培养细胞：

• 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。

• 去除培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

• 按照6孔板每孔加入150～250μL含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～3s内，细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150uL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μL。

• 10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

• 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 二、悬浮培养细胞：

• 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。

• 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

• 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μL含有PMSF的裂解液的比例，加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μL。

• 10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

• 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 三、组织样本：

• 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。

• 把组织小心剪切成细小的碎片，越小越好。

• 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。

• 按照每20mg组织加入150～250μL裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。

• 步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μL裂解液的比例加入含有PMSF的SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。

• 10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

• 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

• 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

• 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

• 如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

• 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

• 溶解SDS Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

• 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验。如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。

• 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。

• 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

• 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

• 声明：产品非质量问题（产品批次间会存在细微的差异，例如颜色、性状等）可在订货日起一个月内无理由退换；质量问题处理原则以产品本身价值为限，不承担其他连带责任。

储存/保存方法

• -20℃，有效期12个月。