免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液

描述

• 本免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（Lysis Buffer for WB/IP Assays）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为20mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，EDTA和Aprotinin等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于PAGE，蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA等实验。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。

产品组成

• A组分：Western/IP裂解液，100mL

• B组分：磷酸酶抑制剂，1mL×2

• C组分：PMSF（100mM），1mL

使用方法

• 试剂准备：取适当量的裂解液，在使用前数分钟内将磷酸酶抑制剂按照1:50加入裂解液中，加入100mM的PMSF并使PMSF的最终浓度为1mM。

• 细胞/组织的裂解：

• 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250µL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250µL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 对于组织样品：用Tissue Scissors将Tissue剪成碎片后，按照每20mg组织加入150-250µL裂解液的比例加入裂解液，并使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

• 蛋白样品收集：充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和IP等操作。

注意事项

• 为取得最佳的使用效果，可以适当分装后-20°C保存使用，避免过多的反复冻融。

• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或2~8°C进行。

• 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

储存/保存方法

• 细胞裂解液A保存于2~8℃，B、C保存于-20℃。有效期12个月。