SDS裂解液

溶液

1、培养的细胞样品：
（1）充分融解 SDS 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（100mM），使其最终浓度为 1mM。
（2）贴壁细胞：吸除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-3 秒后，细胞就会被裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP，应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（3）悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP，应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（4）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等操作。
【裂解液用量说明】：通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200uμl 或 250ul。如果用于 ChIP，建议 6 孔板每孔细胞至少加入 200ul 裂解液。
2、组织样品：
（1）将组织切成细小的碎片。
（2）充分融解 SDS 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（100mM），使其最终浓度为 1mM。
（3）按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加量。
【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】
（4）用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，此过程尽量控制在 1-2 分钟内，以减少蛋白的降解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP，应置于冰上或 4℃继续裂解 10-20min。
（5）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等实验。
（6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

-20℃，有效期12个月。