快速转膜液（10×）

描述

• 快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。使用湿转法（Tank blot）或半干转法（Semi-dry blot）方法，能在15-35分钟内完成转膜过程。本品不含SDS。

• 产品特点：

• 快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。

• 兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶、预制胶、Bis-Tris胶等多种凝胶。

• 转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

• 浓度：10×

使用方法

• 转膜前的准备：5-6张裁好的滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer。

• 一、湿转法（Tank blot）：

• 按照下表配制1×快速转膜液：

• 配制100mL：10×快速转膜液10mL，无水乙醇20mL，超纯水70mL

• 配制500mL：10×快速转膜液50mL，无水乙醇100mL，超纯水350mL

• 配制1L：10×快速转膜液100mL，无水乙醇200mL，超纯水700mL

• 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，浸湿。

• 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能全转移。

• 按照以下顺序做好转印三明治结构：负极（阴极）—一块海绵—2mm滤纸—凝胶—转印膜—1mm滤纸—一块海绵（根据三明治的厚度选择是否使用）—正极（阳极）。

• 注意：要清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

• 将三明治结构放于转移槽中。注：转移槽中可以不用1×快速转膜液，可以用1×TGS（Tris-Glycine-SDS）电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。

• 二、半干转（Semi-dry blot）：

• 按照上表配制1×快速转膜液。

• 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，浸湿。

• 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能转移。

• 按照以下顺序做好转印三明治结构：负极（阴极）—下层滤纸—凝胶—转印膜—上层滤纸—正极（阳极）。半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸大于等于膜大于等于胶大于等于上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。注意：PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

• 三、转移条件（推荐使用恒流转移）：

• 300mA：30 to 35 min

• 330mA：25 to 30 min

• 350mA：25 to 30 min

• 375mA：20 to 25 min

• 400mA：15 to 20 min