广谱型蛋白酶抑制剂(无EDTA，100×DMSO)

描述

• 细胞内源蛋白的表达和降解一般维持平衡状态，因此正常生理条件下内源蛋白含量相对稳定。然而体外研究中，蛋白合成过程终止，而细胞裂解得到的粗提物含大量的内源性蛋白酶，依然能发挥蛋白水解活性，影响蛋白得率，进而干扰相关蛋白表达和功能研究。因此，为了防止蛋白纯化过程的蛋白不被这些蛋白酶降解，需要加入蛋白酶抑制剂来抑制其活性。

• 本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物，包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin，广谱抑制来源于原代细胞、哺乳动物细胞、动植物、细菌、酵母等组织或细胞等裂解物中的多种蛋白酶活性。本品不含EDTA（一种金属蛋白酶抑制剂），适用于活性中心为金属离子依赖性蛋白的研究。本品兼容于后续的固定化金属离子亲和层析（IMAC）、2-D凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析研究。

• 本品以100× DMSO储存液的形式提供，适用于蛋白纯化、蛋白免疫印迹（Western Blot）、免疫（共）沉淀（IP/Co-IP）、蛋白下拉（Pull-down assay）、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）以及激酶研究等多种实验。

使用方法

• 使用前室温平衡直至溶解（注意：DMSO低温下融化较慢，建议25℃下融化），低速震荡以保证各成分均匀。

• 按照1:100的比例（体积比）加到适量抽提试剂（比如细胞或组织裂解液），混匀，再进行样品蛋白的提取。或根据实验目的以及所培养的特定细胞和组织，对使用比例进行摸索和优化。

• 注：按照1:100建议比例，1mL本品可以抑制从20g湿重细胞裂解获得的蛋白酶活性。

常见问题

• 为什么要用蛋白酶抑制剂混合物？
  本蛋白酶抑制剂混合物属于低毒且全面型的蛋白保护试剂，最大限度保护蛋白使其免于被内源性蛋白酶降解。目前对微量表达蛋白如信号通路蛋白、受体蛋白，使用免疫共沉淀（Co-IP）、蛋白下拉（Pull-down assay）等来获取样品，此时蛋白酶抑制剂混合物的加入尤为重要，因其比单一抑制剂（比如PMSF）更为有效。

• 蛋白酶抑制剂混合物是否能进一步稀释使用？
  蛋白酶活性抑制效果和众多因素有关，比如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶类型和浓度、蛋白酶活性高低，以及抑制剂的浓度都会影响最终的保护效果。本品采用经典浓度配比，确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果，建议按照建议比例（1:100）稀释使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制剂混合物，以更低的浓度达到良好的效果，可参照相应比例来进行实验。建议在推荐比例使用上达到理想效果的基础上，可做进一步稀释的摸索和测试。

• 传统实验常用PMSF来保护蛋白，蛋白酶抑制剂混合物与其相比有何优势？
  PMSF是经典的L-Serine蛋白酶抑制剂，广泛用于细胞裂解纯化蛋白过程。然而，其具有许多明显的缺点，逐步被保护效果更好且更安全的单一蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物所替代。主要缺点：1）毒性较高，半致死量为200mg/kg；而其替代物AEBSF，半致死量为2834mg/kg，毒性远低于PMSF十四倍多，同时保持相当的抑制效果，且对很多种L-Serine蛋白酶的抑制比PMSF更迅速；2）半衰期短，在水溶液中只有30min，细胞裂解过程中太容易失效。而蛋白酶抑制剂cocktail不仅仅保护全面且效果持续更加久。

• DMSO是否会对实验结果产生副作用？
  DMSO基本不会影响实验结果。生物科学领域DMSO为很多生物活性物质的有机溶剂，比如蛋白结晶、免疫共沉淀等要求较高实验中也会使用DMSO。细胞研究中，低温条件下DMSO还是一种广泛使用且优秀的细胞冷冻保护剂。

注意事项

• 传统蛋白酶抑制剂（比如：AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin）不能够抑制某些去泛素化（DUB）蛋白酶（如ATAXIN-3）的功能。

• 本品具广谱蛋白酶抑制活性，不具有磷酸酶抑制活性。若需要进行磷酸化蛋白研究，请选择广谱型磷酸酶抑制剂混合物（100×储液）（货号：abs9162）来满足实验要求。

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存/保存方法

• -20℃保存，有效期12个月。避免反复冻融，建议分装储存。

运输方式

• 蓝冰运输