Western一抗二抗去除液（强碱性）

描述

• Western一抗二抗去除液又称膜再生液或Western抗体洗脱液（Stripping buffer），用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测GAPDH、β-actin等表达量相对稳定的管家蛋白或其它蛋白作为参照。Stripping buffer可以洗脱一抗二抗，非常方便地重新利用使用过的膜，检测其它蛋白。Stripping buffer多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱不宜重复利用膜，一般可以利用2～3次。

• 通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

• Western一抗二抗去除液（强碱性）主要依靠碱性来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失，适用于Western化学发光检测后的蛋白膜的重复利用，尤其适用于PVDF膜，其次为硝酸纤维素膜。非化学发光试剂进行的Western检测（如DAB，NBT/BCIP）不适用于本试剂。

使用方法

• 在膜完成Western化学发光检测后，蒸馏水中漂洗5min。

• 弃蒸馏水，加入Western一抗二抗去除液（强碱性），覆盖住膜。

• 摇床上漂洗15-20min。

• 弃液，尽量把Western一抗二抗去除液（强碱性）去除干净，必要情况下，可以用滤纸吸干。

• 加入蒸馏水振荡漂洗2～3次，每次漂洗3～5min。

• 入封闭液进行封闭后（推荐Tyrosine或脱脂奶粉作为封闭液），进行Western后续操作。

注意事项

• 使用辣根过氧化物酶标记的抗体时，封闭液必须使用5%脱脂奶粉配制。使用碱性磷酸酯酶标记的抗体时，封闭液必须使用酪蛋白（casein）配制。

• Western一抗二抗去除液（强碱性）特别适用于PVDF膜的再生，硝酸纤维素膜的再生效果不如PVDF膜。

• Western一抗二抗去除液（强碱性）适用于ECL等类似的化学发光液的检测后的一抗二抗洗脱。非化学发光试剂进行的Western检测（如DAB，NBT/BCIP）不适用于本试剂。

• Western一抗二抗去除液（强碱性）有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存/保存方法

• 4℃保存，有效期12个月。