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NP-40裂解液

简要描述:NP-40裂解液充分融解 NP-40 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(Mw:174.2 g/mol),使其最终浓度为 1mM。

  • 产品型号:abs9160
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-19
  • 访  问  量:46

详细介绍

品牌自营品牌货号abs9160
供货周期现货应用领域生物产业
产品描述
NP-40裂解液描述

NP-40,也称 Nonidet P-40(乙基苯基聚乙二醇),是一种常见的非离子型去垢剂。

NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液,主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40 以及焦磷酸钠,正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于常规的蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂,不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。

使用方法A培养的细胞样品
(1)充分融解 NP-40 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(Mw:174.2 g/mol),使其最终浓度为 1mM。
(2)贴壁细胞:吸除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。裂解 15-30 分钟,通常裂解液接触细胞 1-3 秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
(3)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等实验。
【裂解液用量说明】:通常 6 孔板每孔细胞加入 150ul 裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200ul 或 250ul。
NP-40裂解液 B组织样品
(1)将剪切成细小的碎片。
(2)充分融解 NP-40 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(Mw:174.2 g/mol),使其最终浓度为 1mM。
(3)按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】
(4)用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解,此过程尽量控制在 1-2 分钟内,以减少蛋白的降解。
(5)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等实验。
(6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分.
注意事项1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
2、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同,需要根据具体条件进行条件筛选;
3、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
基本信息
储存/保存方法-20℃冻存
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究

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