RIPA裂解液（强）

RIPA裂解液（强）  溶液

一、培养的细胞样品
1、充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。
2、贴壁细胞：吸除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3、充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
二、组织样本
1、将组织的剪切成细小的碎片，使用匀浆仪进行匀浆。
2、充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。
3、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】
4、充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
5、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。
【注意】：RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子，例如NF-kB、p53，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
2、RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为
含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可
以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过
超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
3、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同，需要根据具体条件进行条件筛选；
4、若裂解液产生沉淀或者析出，可在 37℃水浴中孵育，振荡使沉淀或析出物溶解，若不能
溶解，可适当加热助溶。
5、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

-20℃保存，有效期12个月