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首页 > 产品中心 > > 常规生化试剂 > abs9229RIPA裂解液(强)

RIPA裂解液(强)

简要描述:RIPA裂解液(强):本意为 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种,根据其裂解强度的不同,大致可分为强、 中、弱三类,应用上会有一些差异。

  • 产品型号:abs9229
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-15
  • 访  问  量:100

详细介绍

品牌自营品牌货号abs9229
供货周期现货应用领域生物产业
产品描述
描述

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer),本意为 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种,根据其裂解强度的不同,大致可分为强、 中、弱三类,应用上会有一些差异。

本品为裂解性较强的 1×RIPA 裂解液,主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0.1% SDS,以及正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白 降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂,不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。
RIPA裂解液(强)产品组分

组分名称规格
AARIPA Lysis Buffer (Strong)100ml
BPMSF(100mM)1.5ml
外观
RIPA裂解液(强)  溶液
使用方法
一、培养的细胞样品
1、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。
2、贴壁细胞:吸除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
【裂解液用量说明】:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
二、组织样本
1、将组织的剪切成细小的碎片,使用匀浆仪进行匀浆。
2、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。
3、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】
4、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
5、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。
【注意】:RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子,例如NF-kB、p53,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项
1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
2、RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为
含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可
以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过
超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
3、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同,需要根据具体条件进行条件筛选;
4、若裂解液产生沉淀或者析出,可在 37℃水浴中孵育,振荡使沉淀或析出物溶解,若不能
溶解,可适当加热助溶。
5、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
基本信息
储存/保存方法
-20℃保存,有效期12个月
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究


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