Human IL-23 ELISA Kit

IL-23 p19/IL-12 p40, IL23, IL-23, IL-23A, IL-23-A, IL-23p19, IL-23p19/IL-12p40, IL23P19P19, interleukin 23 p19 subunit, interleukin 23, alpha subunit p19, interleukin-23 subunit alpha, Interleukin-23 subunit p19, JKA3 induced upon T-cell activation, MGC79388, SGRF, SGRFIL-23 subunit alpha

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-23 抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生wu素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的IL-23与固相抗体和检测抗体结合，形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物，避光显色。加入终止液终止反应，在 450 nm 波长(参考校正波长 540nm 或 570nm) 测定吸光度值。

Human

双抗夹心法

125.0 - 8,000 pg/mL

实验所需自备试验器材
酶标仪（可测量 450nm 检测波长的吸收值及 540nm 或 570nm 校正波长的吸收值） 
高精度加液器及一次性吸头 
蒸馏水或去离子水 
洗瓶（喷瓶）、多通道洗板器或自动洗板机 
500mL 量筒 


（1）样品收集及储存：
细胞培养上清：颗粒物应通过离心去除；立刻检测样本。样本收集后若不及时检测，建议按一次使用量分装，冻存于-20℃冰箱内，避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂（1×） 稀释。 血清：使用血清分离管（SST）收集样本，样品室温放置 30 分钟。离心 15 分钟，转速为 1000 g。立即取出血清，并立即检测。样本收集后若不及时检测，建议按一次使用量分装，冻存于≤-20℃冰箱内，避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂（1×）稀释。 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸作为抗凝血剂收集血浆，在收集后 30 分钟内离心 15 分钟，转速为 1000 g，并立即检测。样本收集后若不及时检测，建议按一次使用量分装，冻存于≤-20℃冰箱内，避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂（1×）稀释。
（2）检测前准备工作：
使用前请将所有试剂和样本放置于室温，静置 15 分钟。建议所有的实验样本和标准品做复孔检测
1×洗涤液配制：试剂盒中的浓缩洗涤液为20×母液，使用前需使用蒸馏水稀释为1×工作液。例：取10ml浓缩洗涤液+190mL蒸馏水定容至200mL，实际操作时可先计算使用量，再进行配制。
1×稀释用缓冲液配制：试剂盒中的浓缩稀释用缓冲液为10×母液，使用前需使用蒸馏水稀释至1×工作液。例：取3ml浓缩稀释用缓冲液+27mL蒸馏水定容至30mL。实际操作时可先依据样本稀释倍数，计算所需的稀释用缓冲液用量，再进行配制。
检测抗体：将干粉离心至管底，使用110uL稀释用缓冲液（1×）溶解，室温静置5min后得到100×母液；使用前需稀释为1×工作液。按照每孔用量100uL计算所需体积。例：使用了10个孔，则取10uL的100倍工作浓度的检测抗体，使用稀释用缓冲液（1×）定容至1mL，得到1ml的1×工作浓度的检测抗体。
SA-HRP： SA-HRP为40×母液，使用前需使用稀释缓冲液（1×）稀释配制成1×工作液，每孔所需量为100 uL。例：使用了10个孔，则取25uL的40×母液+975uL稀释用缓冲液（1×）定容至1mL，得到1ml的1×工作浓度的检测抗体。
显色剂：按每孔100 uL，计算当次试验所需要用量，取出相应体积的显色剂，避光；取出的显色剂仅供当日使用。
标准品：冻干标准品用稀释用缓冲液（1×）重溶，重溶体积1000uL，得到浓度为 8000pg/mL 标准品母液。轻轻震摇至少 5 分钟，其充分溶解。
每个稀释管中加入 300 uL 稀释用缓冲液（1×）。将标准品母液参照下图做系列稀释，每管须充分混匀后再移液到下一管。没有稀释的标准品母液可用作标准曲线最高点(8000pg/mL)，稀释用缓冲液（1×）可用作标准曲线零点（0 pg/mL）。二、实验操作步骤
（1）准备好所有需要的试剂和标准品；
（2）从已平衡至室温的密封袋中取出微孔板，未用的板条请放回铝箔袋内，重新封口；
（3）向微孔板中加入300uL洗涤液，静置浸泡30秒，弃掉洗液在吸水纸上将微孔板拍干，请立即使用不要让微孔板干燥；
（4）分别将不同浓度标准品，实验样本或者质控品加入相应孔中，每孔 100 uL。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育 2 小时;
（5）将板内液体吸去，使用洗瓶、多通道洗板器或自动洗板机洗板。每孔加洗涤液 300uL，然后将板内洗涤液吸去。重复操作 3 次。每次洗板尽量吸去残留液体会有助于得到好的实验结果。最后一次洗板结束，请将板内所有液体吸干或将板倒置，在吸水纸拍干所有残留液体；
（6）在每个微孔内加入 100 uL 检测抗体。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育 2 小时；
（7）重复第 5步洗板操作；
（8）在每个微孔内加入 100 uL SA-HRP，室温孵育 20 分钟。注意避光；
（9）重复第 5 步洗板操作；
（10）在每个微孔内加入 100 uL 显色液，室温孵育 5-30 分钟，注意避光；
（11）在每个微孔内加入 50 uL 终止液，孔内溶液颜色会从蓝色变为黄色。如果溶液颜色变为绿色或者颜色变化不一致，请轻拍微孔板，使溶液混合均匀；
（12）加入终止液后 30 分钟内，使用酶标仪测量 450nm 的吸光度值，设定 540nm 或 570nm 作为校正波长。如果没有使用双波长校正，结果准确度可能会受影响；
（13）计算结果：将每个标准品和样品的校正吸光度值(OD450-OD540/OD570)、复孔读数取平均值，然后减去平均零标准品 OD 值。使用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线。另一种方法是，可以通过绘制标准品浓度做对数与相应 OD 值对数生成曲线，并通过回归分析确定最佳拟合线。这个过程可生成一个足够使用但不太精确的数据拟合。若样本经过稀释，计算浓度时应乘以稀释倍数。

注：提供的标准曲线数据仅供参考，应根据同次试验所绘标准曲线计算样本含量。
三、试剂盒参数
1.回收率
在细胞培养基样本中掺入不同水平的人 IL-23 ， 测定其回收率。 回收率范围在93.9-103.2%，平均回收率在99.8% 。 在人血清样本中掺入不同水平的人 IL-23，测定其回收率。回收率范围在 91.7-99.1%，平均回收率在 96.2%。
2.灵敏度
人IL-23 的zui低可测剂量（MDD） 一般小于 20.5pg/mL。 zui低可测值是根据 20 个标准曲线零点吸光值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应浓度。
3.校正
此 ELISA 试剂盒经 Sf 21 表达的高纯度重组人 IL-23 蛋白所校正。
4.线性
4 个不同的样本中掺入高浓度的人 IL-23， 然后用稀释剂（1×） 将样本稀释到检测范围内， 测定其线性。

5.特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 IL-23蛋白。 将以下因子用稀释剂（1×） 配制成 50 ng/mL 的浓度来检测与人 IL-23的交叉反应。 将 50 ng/mL 的干扰因子掺入中间范围的重组人 IL-23对照品中， 来检测对人EGF 的干扰。 没有观察到明显的交叉反应或干扰。重组人 IL-12 Rβ1/Fc Chimera 及重组人 IL-23 R/Fc Chimera 没有交叉反应，但当浓 度>3125pg/mL 时有干扰。

四、常见问题解析
1.白板（显色完成后，无颜色出现）

2、花板（空白、阴性阳性对照正常，但标本孔OD值明显偏高）

五、总体步骤图

白细胞介素 23 (IL-23) 是一种由 IL-23 te有的 p19 亚基和 IL-12 共享的 p40 亚基组成 的二硫化物连接的细胞因子。它是由活化的巨噬细胞、小胶质细胞及和单核细胞来源的树突 状细胞产生，以应对包括某些细菌和病毒和/或其组分等病原体的攻击。功能性 IL-23 受体复合物包含两个受体亚基，IL-12 受体 β1 亚基(IL-12Rβ1)和 IL-23-特异性的受体亚基(IL-23 R)。该受体复合物表达在小鼠 Th1、Th2细胞，骨髓树突状细胞，活化的巨噬细胞和CD4+CD45Rb(low)记忆 T 细胞。 IL-23 免疫途径诱导最早的中性粒细胞到感染灶的募集。 IL-23 亦加强了Th17 细胞的发展和保持。它促进了Th17 介导的自身免疫和肿瘤进展。在人类，IL-23 在包括牛皮癣、克罗恩病和多发性硬化在内的几种免疫功能失调疾病中表达上调。

Human

未开封试剂盒，2-8°C储存。

（1）仅供科研使用，不可用于体外诊断；
（2）请在试剂盒有效期内使用；
（3）不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
（4）样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释剂（1×）稀释后重新检测；若细胞培养上清液样本需分布稀释，除最后一步用稀释剂稀释外，其它中间稀释可采用细胞培养基；
（5）检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。
（6）试剂盒中的终止液是酸性溶液，使用时请做好眼镜、手、面部及衣服的防护。