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人正常胃类器官培养基

简要描述:人正常胃类器官培养基(Human Gastric Organoid Culture Medium),储存/保存方法:4°C保存,有效期3个月;-20°C保存,有效期1年。

  • 产品型号:abs9736
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-21
  • 访  问  量:1318

详细介绍

品牌absinCAS-
分子式-纯度-
分子量-货号abs9736
规格100mL;500mL供货周期现货
主要用途-应用领域化工,生物产业,综合

使用方法:

1、原代 
(1)取材后的组织放在预冷的(2-8°C)组织保存液的取样瓶中,快速转运至洁净实验室进行组织处理和细胞分离,拍照并登记信息。
(2)准备若干培养皿,加入 4℃预冷的人正常胃类器官组织原代培养缓冲液#abs9731备用。
(3)取样瓶消毒,将组织放入培养皿中,利用人正常胃类器官组织原代培养缓冲液清洗三次后,利用眼科剪或手shu刀将组织jian切成体积约为 1-3mm3的组织块。
(4)组织用人正常胃原代zuzhi消化液#abs9783消化,4℃震荡消化15-20min,(消化过程中随时观察消化情况)。
(5)取少量液体在显微镜下观察,镜下观察到较多的单个细胞或 70um 以下的细胞簇后,加入三倍体积人正常胃类器官组织原代培养缓冲液终止消化。
(6)使用100um孔径的筛网进行过滤,将滤液收集后,于300g富集离心5min后移去上清,添加人正常胃类器官组织原代培养缓冲液重新重悬离心。
(7)基质胶计算:第6步后观察收集到的组织体积,添加25倍组织体积的基质胶#abs9495 重悬铺板。
(8)24孔细胞培养板为例,每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板(4℃下操作)。
(9)将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶,添加人正常胃类器官培养基(恢复室温)进行培养。


2、类器官传代培养
(1)移液枪吸去培养基,每孔添加1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液#abs9730放置2min。
(2)移液枪轻柔吹打基质胶,收集在15ml离心管中,4℃静置10min。(每6-8孔为一组)
(3)a:类器官数量不足或体积较小时: 离心5min弃去上清,添加适量人正常胃类器官传代培养缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第4步。
         b:类器官数量较多或体积较大时:离心5min弃去上清,添加适量类器官传代消化液#abs9520 消化2-3min,添加人正常胃类器官传代培养缓冲液终止消化,离心5min弃去混合液,添加适量人正常胃类器官传代培养缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第4步。
(4)类器官收集后,添加基质胶重悬,每孔25ul基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15min添加500ul人正常胃类器官培养基


3、类器官冻存
(1)移液枪吸去培养基,每孔添加1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液放置2min。
(2)移液枪轻柔吹打基质胶,收集在15ml离心管中,4℃静置10min。(每6-8孔为一组)
(3)离心5min弃去上清,添加适量人正常胃类器官传代培养缓冲液再次重悬,300g离心5min弃去液体。
(4)添加适量类器官冻存液#abs9519,轻柔吹打重悬,以24孔细胞培养板为例:密度为2个孔冻存1管,每管体积1.4ml。
(5)做好标记信息,进行程序降温后,移入液氮长期保存。


4、类器官复苏
(1)取10ml人正常胃类器官传代培养缓冲液于15ml离心管中。
(2)从液氮罐中取出冻存的类器官细胞,快速置于 37℃水浴锅中融解。
(3)水浴融解过程中,需轻轻摇动冷冻管,以确保冻存液在 1-2min内wan全融解。
(4)将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml 离心管,使用移液管轻轻吹打6-8次,300g 离心 5min,然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量人正常胃类器官传代培养缓冲液重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。
(5)基质胶重悬,每孔25ul基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15min成胶,添加500ul人正常胃类器官培养基


储存/保存方法:

4°C保存,有效期3个月;-20°C保存,有效期1年。

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