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支原体检测试剂盒(PCR法)

简要描述:本支原体检测试剂盒是采用PCR方法,特异性的检测各种培养细胞生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)中支原体的污染。

  • 产品型号:abs9588
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-17
  • 访  问  量:158

详细介绍

品牌absin货号abs9588
规格50T供货周期现货
应用领域化工,生物产业,制药

描述:

支原体污染会对细胞各个方面都造成不良影响,已经成为细胞培养中高度重视的问题,因此,定期进行支原体污染检测是十分必要的。本支原体检测试剂盒是采用PCR方法,特异性的检测各种培养细胞生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)中支原体的污染。
试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rRNA序列的保守区域设计的特异性引物,可直接使用细胞培养液作为PCR模板,特异性扩增支原体DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小时内即可完成,本试剂盒检测灵敏度高,可检测低至20个拷贝的支原体。


使用方法:


1、样品准备:取适量待检细胞培养上清于洁净的PCR管中,利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板。血清样本可利用Mycoplasma Free Water稀释后,取适量样本于洁净的PCR管中,利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板;


2、PCR体系配制:每次实验需设置阴性对照(将1 μL待检样品换成等量的Mycoplasma Free Water)与阳性对照(在1 μL待检样品中加入0.5 μL Positive Control后一起作为Template),实验时戴一次性口罩与手套,谨慎操作,防止操作不当引入外源支原体污染;


组分体积
Template1ul
Mycoplasma Primer Mix2ul
Mycoplasma PCR Mix(2×)10ul
Mycoplasma Free WaterTo 20ul





3、PCR程序设置:


StepTemperatureTimeCycles
Initial Denaturation98℃2 min1
Denaturation98℃20 S30
Annealing56℃25 S
Extension72℃10 S
Final extension72℃5 min1
Hold4-16℃Forever




4、凝胶电泳:取10 μL PCR产物,使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测;


5、结果分析:每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况,阳性条带大小500 bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是PCR体系中出现污染,建议重新实验确认结果。如有必要,也可对PCR产物进行常规测序,以确定具体的支原体种属。


注意事项:

1、本试剂盒可以检测M.orale,M.arginini,M.bovis,M.fermentans,M.gallisepticum,M.hominis,M.pirum,Ureaplasma spp,M.hyorhinis,M.pneumoniae,A.laidlawii等至少11种以上支原体污染。
2、所有试剂在使用前于冰上解冻好、混匀,使用完毕后于-20℃保存。
3、每次实验必须设置阴性对照、阳性对照,实验组建议设置样品模板梯度。
4、操作时必须佩戴口罩,严格按照PCR操作标准,防止引入外源污染影响实验结果。
5、为了确保细胞实验的可靠性及稳定性,建议定期进行支原体污染检测。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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