高通量筛选还在用MTT？CCK-8：无需溶解、毒性更低、数据更稳

高通量筛选还在用MTT？CCK-8：无需溶解、毒性更低、数据更稳

一、什么是 CCK8 试剂盒？

CCK-8试剂盒是基于 WST8 底物的比色法细胞活力检测试剂，试剂为即用型单瓶溶液。活细胞线粒体脱氢酶在电子耦合试剂协助下，将 WST8 还原为水溶性橙色甲臜产物，甲臜生成量与活细胞代谢水平、活细胞数量正相关，使用酶标仪在 450 nm 读取 OD 吸光值完成定量。适配 96 孔板高通量体系，无需换液、无需有机溶剂溶解沉淀，孵育后可多次读板，贴壁与悬浮细胞均可检测。

二、和 MTT 法相比具备哪些技术差异？

MTT 被还原后产生不溶于水的甲臜结晶，需要 DMSO 溶解，操作步骤多，容易引入操作误差；CCK8产物水溶性，省去溶解步骤，实验重复性更好，灵敏度更高，试剂对细胞毒性低，可多时间点读板。MTT 成本较低适合粗略筛选；CCK8 更适合正式定量实验。二者均依赖线粒体脱氢酶活性，衰老、自噬细胞会干扰结果，实验需要设置空白孔与细胞对照校正背景信号。

三、CCK8 试剂盒适用于哪些科研实验？

CCK-8试剂盒仅用于科学研究，不可用于临床诊断，适配贴壁、悬浮细胞。主要用于药物细胞毒性评价、抗肿瘤化合物高通量筛选、细胞增殖测定；也可用于材料生物相容性检测、细胞培养条件优化。按照培养基体积 10% 比例加入 CCK8 试剂，培养箱孵育 14 h 后读板；避光 4℃保存，避免反复冻融。实验需要设置空白孔扣除培养基本底，减少孔间差异带来的结果偏差Absin。

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