问题一:缺乏染色可能的原因检测方法和相应的措施没有抗原用原位杂交的方法检测蛋白表达(有时即使能检测到mRNA。翻译也有可能受阻)由于错误的储存方法按照说明书储存。通常,将抗体按照足够配制单次实验工作溶液的体积分装。储存在手动除霜冰箱中(-20到-70℃),避免反复冻融无效的一抗或二抗单独检查报告系统以评估试剂的有效性。固定不充分尝试增加固定时间或改用不同的固定剂过度固定减少浸润或固定后步骤的时间。如果必须使用浸润法固定(例如病理实验室中的尸检组织或切片),可以用抗原修复试剂修...
都说是封闭,羊血清究竟封闭的是什么(抗原?)那接下来加一抗怎么又能反应结合?不是封闭了吗?封闭的目的是为了减少非特异染色。这里,允许小编介绍下免疫组化中封闭血清的原理,封闭血清的原理主要有两点:*是待检样本会非特异性的和蛋白结合,从而导致背景过高,因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合,从这点看,BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,与抗体特异性无关,封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。...
问题一:高背景可能的原因解决方法去污剂不溶性蛋白有残留离心后立即去除上清,沉淀中留有不溶性蛋白质,如果再次有悬浮发生,再次离心洗涤不充分盖上管盖离心前反复颠倒几次非特异性蛋白质与珠子结合珠子用BSA预封闭不充分,确保牛血清白蛋白(组分V)新鲜,新鲜珠子与含1%牛血清白蛋白的PBS孵育1小时,使用前PBS洗3-4次使用的抗体特异性不强使用亲和纯化的抗体,预先吸收使用太多抗体导致非特异性结合检查推荐抗体用量。尝试使用更少的抗体细胞裂解液中含有太多的细胞或太多蛋白,导致洗脱液中很多...
问题一:转膜不充分可能的原因验证或解决方法膜没有*均匀湿透使用100%甲醇浸透膜靶蛋白分子量小于10kDa选择小孔径的膜,缩短转移时间靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液PH值可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液甲醇浓度过高过高甲醇浓度浓度会导致蛋白质与SDS分离,从而沉淀在凝胶中,同时会使凝胶收缩或变硬,从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替转移时间不够对于厚的胶以及高分子量蛋白需要延长转移时间问题二:背...
注意事项★一定要使用我们盒内配套的电泳缓冲液;★上样量和浓度不能过高。1.我们的预制胶与哪些品牌电泳槽兼容?●Bio-RadMini-PROTEAN(II/3/TetraSystem);●HoeferMightySmall(SE250/SE260/SE280);●LifeTechnology(Invitrogen);●NovexMini-Cell;●MiniGelTank(A25977)(请与EZbiolab特制挡板配合使用);●北京六一DYCZ-25E;●君意东方JY-SC...
WesternBlot(WB)即蛋白免疫印迹实验,是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小讲蛋白分离,再通过电场力将蛋白转移到杂交膜上。然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析zui流行和成熟的技术之一。在WB过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样,只是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个WB参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标...
鸡胚提取物它的K、Fe、Se矿物元素和维生素A、D、B2等含量也很高。这使得它不但具有补充这些营养素的作用,而且,还可能有一些保健功能。本试验用低硒饲料喂饲的小鼠4周后,各剂量组和低硒对照组动物全血GPX活性抑制率30%,试验至8周末,低硒组血硒降低,全血GPX活性抑制率仍30%。说明硒营养不良动物模型建立成功。而且,低硒组动物的血硒、GPX活性保持在较低水平,显示硒营养不良动物模型稳定。小鼠的脑、肝硒含量均降低(P0.05),脑、肾、肝GPX也显着性降低(P0.05),而全...
免疫学三大工具,IHC、Westernblot、ELISA,分别用于定位,定性和定量!IHC(免疫组化)是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。ELISA(酶联免疫吸附试验)用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品...
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