Marker，染色及内参等相关问题Q：用的是预染marker，但是电泳总跑不全8条带，请问什么原因？怎样改善？胶用过8％，10％，12％，都是这样。marker是新买的。A：一般来说，是小分子量Marker跑走了，可以增加胶浓度或减少电泳时间。梯度胶也是不错的选择。（梯度凝胶爱必信就可提供呦）Q：WesternBlot哪种染色好？A：（1）阴离子染料是zui常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达到1.5μg，考马虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S...

针对抗体常见问题Q：做细胞信号传导，要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？A：对二抗有无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。Q：免疫组化和WesternBlot可以用同一种抗体吗？A：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线...

针对样品的常见问题：Q：细胞水平要做WesternBlot，多少细胞提的蛋白够WesternBlot？A：一般地5*106就足够了。Q:同一样品能同时提RNA又提蛋白吗，这样对WesternBlot有无影响?A：能，没有问题的。Q:同一蛋白样品能同时进行两种因子的WesternBlot检测吗？A：当然可以，有的甚至可以同时测几十种样品。Q:如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？A:如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时建议加上NaF去抑制磷酸化酶...

Western免疫印迹（WesternBlot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。我们将通过以下几个方面来详细地介绍一下WesternBlot技术：【原理】与Southern或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如PVDF膜）上...

预染蛋白marker是WesternBlot实验中常用的一种试剂，那么预染蛋白marker到底是什么？用的时候又有哪些注意事项呢？预染蛋白marker其实就是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白marker的出现方便了我们的实验，可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。比如使用垂直电泳时*分辨区域大约在胶的2/3处，我们使用预染Marker就可以预测电泳的进程。当目标蛋白进入*分辨区时就可以停止电...

爱科研，必信它！科研百宝箱生化试剂领域专家，爱必信(Absin®)重磅推出信号通路明星小分子抑制剂！作为爱必信生化试剂产品线的补充版，明星小分子抑制剂系列延续了爱必信质量可靠，，产品全面的优势，实现了对爱必信生化试剂的有力补充，更好地满足广大科研工作者的需要。爱必信，以亲和力的价格,丰富全面的产品线，快速的售后服务为用户提供质量可靠的小分子抑制剂！产品特点：☆质量可靠，提供高纯度的化合物！☆产品丰富全面，超过5000种抑制剂可供选择！☆确保再次供应！☆规格包装灵活，可...

Forskolin在不与细胞表面受体相互作用前提下刺激腺苷酸环化酶活性。在脂肪细胞中Forskolin's促进cAMP产生进而可以抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒作用以及组胺释放，降低血压、眼内压，抑制血小板聚集，促进血管舒张，支气管扩张和甲状腺激素分泌，刺激脂肪分解。Forskolin抑制血小板活化因子(PAF)的结合,这种抑制不依赖于cAMP形成可能是Forskolin直接作用于PAF或者通过干扰PAF与它的受体结合实现的，似乎对多种膜转运蛋白也有效果并且可以抑制脂肪细胞...

问题一:阴性对照出现阳性结果可能的原因解决的方法试剂/样品污染试剂和样品可能被污染，或者由于孔之间的溅洒交叉污染。使用新鲜试剂，小心操作移液器夹心ELISA-检测抗体与包被抗体反应确定使用的是正确的包被抗体和检测抗体，他们之间不会相互反应酶标板洗板不*用洗液充满板空确保每孔被充分洗涤，洗板前确保所有的剩余抗体溶液被倒净抗体量过多导致非特异性结合根据推荐用量使用抗体尽量使用较少的抗体问题二：酶标板整体背景高可能的原因解决的方法结合反应太强或时间过长检查底物的稀释，使用建议的稀释...