Q：步骤上的可选步骤能否省略？A：该试剂盒是经过实验验证的，再进行验证实验的时候实验室都是要做这个可选步骤的，建议不要省略，按照说明书操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么选？A：各5ul就可以了Q：超声破碎冰上操作是必须的吗？4℃条件能否微调？A：建议冰上操作，4℃是可以微调的。Q：beads出现吸不出来的情况，怎么处理？A：吸之前需注意枪头要剪一下再吸，如若beads吸不上来，可加入等体积的20%乙醇混匀后再吸。Q：如果没有超声破碎仪的话，能不能用酶解...

1、血清封闭：组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；因此需要使用封闭剂进行封闭。常用试剂为血清和BSA等。封闭血清一般是和二抗同一来源的，但不能与一抗来源一致。2、一抗和二抗浓度和孵育时间：一抗孵育条件在免疫组化反应中zui重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果*；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30m...

标签抗体，别名为抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子中决定抗原特异性的特殊区域或基团，是与抗体特异性结合的结构或序列。随着生物技术的发展，科研人员可以通过DNA重组技术，构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白，进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化，以达到研究的需求。常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag标签—抗Flag标签抗体Flag标签系统是利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白。Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，该...

1、标本固定：固定的目的是：①，防止标本从玻片上脱落；②，除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③，固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用4%多聚甲醛。2、脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要*浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则容易裂片和脱片等。3、脱蜡和水化：这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分别10min，但当天制好的切片可以60度3-4h。...

Q:什么是霍乱毒素？A:霍乱毒素由（Choleratoxin,CT）两个亚单位组成，即A亚单位（CTA）和B亚单位（CTB）。A亚单位是霍乱毒素的活性部分，B亚单位的主要功能是通过与哺乳动物小肠上皮细胞上的单唾液酸神经节苷脂GM1结合而使得A亚单位进入细胞。Q:霍乱毒素是如何反激活的？A:霍乱毒素由霍乱操纵子（ctx）编码，从5'到3'方向，依次是反激活因子ToxR的识别序列、启动子、A基因（ctxA）、B基因（ctxB）和不依赖于r因子的转录终止系列。现在普遍认为操纵子中只...

血清小知识血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出...

检测某一个基因的表达产物或者要比较表达产物量的相对变化，方法是westernblot。而WesternBlot试验中比较这些的前提条件是等量的细胞上样，这样才有比较的基础。而人为的操作会产生一定的误差，这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参来校正。因此选择一个合适的内参抗体来校正上样误差是非常重要的。所以严谨的WesternBlot实验设计中需要有良好的参照体系，后续的实验结果分析才具有说服性。在WesternBloting实验中，可能内参即是内部参照(Intern...

激动剂抑制剂可抑制肠神经系统释放ACh,减缓胃肠道动力.在健康人，哌波色罗能对抗西沙必利对结肠的促动力作用，延缓结肠传输，但不改变结肠的感觉和顺应性；拮抗外源性.5-HT所致的肠道蠕动反射。在腹泻型IBS患者中，哌波色罗可以延长口-盲传输，使结肠蠕动减弱，降低直肠敏感性，从而改善患者的症状。激动剂抑制剂可升高触发小肠蠕动的压力感受阈值和降低小肠壁的顺应性。Meuse等发现在脊髓背角浅层初级传入神经末梢有5-HT7受体的表达，参与大鼠伤害性感受器的激活。目前尚无5-HT7受体制...