全国服务咨询热线:

15502157206

article技术文章
首页 > 技术文章 > 类器官传代培养全流程及答疑解惑

类器官传代培养全流程及答疑解惑

发布时间:2022-11-30      点击次数:281

 

准备工作
1.仪器设备
CO2 培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅、水浴摇床,医用冰箱、-80°冰箱、移液器(一套)。

2.试剂耗材
小肠类器官培养基、小肠类器官缓冲液、类器官传代消化液、硫酸庆大霉素、双抗、基质胶、60mm细胞培养皿、15ml离心管、1.5ml EP管若干、4度冰盒。

 

操作流程
1.类器官操作流程之——样本准备
(1)移液器吸去培养基,每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液B放置2min。


(2)移液抢轻柔吹打基质胶,收集在15ml离心管中,4℃静置10min。(每6-8孔为一组)。



2. 
类器官传代培养之——样本消化

A:类器官数量不足或体积较小时: 离心5min弃去上清,添加适量小肠类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第3步。

B:类器官数量较多或体积较大时:离心5min弃去上清,添加适量类器官传代消化液D消化2-3min,添加小肠类器官缓冲液终止消化,离心5min弃去混合液,添加适量小肠类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管,300g离心5min弃去液体进行第3步。


3. 类器官传代培养之——铺板

类器官收集后,添加基质胶重悬,每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15min添加500μl小肠类器官培养基。



答疑解惑

 

Q1:类器官培养一代需要多长时间?

A:一般需要5-7天,长得快可3-5天。

Q2: 初始量样本量10*5,活性大于90%,可以培养出多少类器官?

A:培养一代,一般是24孔板的10个孔。

Q3:原代培养中消化下来的细胞是只有干细胞吗?

A:消化下来的细胞包含各个种类的细胞,但是能培养成类器官的只有成体干细胞和肿瘤干细胞,没有干性的细胞在培养过程中不会增殖分化,养的过程会死掉。

Q4:想要CTC培养,需要多少样本量呢?

A:至少50+个CTC,取样时可以多取一些血,CTC细胞占比比较少。

Q5:类器官量多小的时候不需要加消化液?

A:一般是100um以下。

Q6:如果要做药筛需要额外去除基质胶和培养基吗?

A:和传代培养铺板一样,药用培养基稀释就可以。

Q7:类器官培养一定需要基质胶吗?

A:基质胶主要是为类器官提供支撑作用和营养物质,基质胶主要成分有laminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans。

Q8:取材时为什么剔除脂肪组织?脂肪肝可以做类器官培养吗?

A:脂肪组织影响后续消化分离得到的干细胞纯度,脂肪肝也是可以做类器官培养的,消化前可以多清洗几次,去掉表面脂肪。

Q9:类器官可以直接用细胞系培养吗?

A:用细胞系培养的不能成为类器官,只能称之为细胞球。

 
本期小爱推荐
类器官培养基试剂盒


货号

品名

规格

abs9514

  Organotial小鼠肠类器官培养基试剂盒

1kit

abs9516

  Organotial小鼠肝类器官培养基试剂盒

1kit

abs9515

  Organotial小鼠肺类器官培养基试剂盒

1kit

abs9517

  Organotial小鼠胰腺类器官培养基试剂盒

1kit

abs9446

  Organotial乳腺癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9448

  Organotial子宫内膜癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9445

  Organotial结直肠癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9444

Organotial肝癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9443

Organotial肺癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9449

Organotial胃癌类器官培养基试剂盒

1kit

abs9447

Organotial胰腺癌类器官培养基试剂盒

1kit


 
相关产品推荐

货号

品名

规格

周期

abs9490

  基质胶(标准型、含酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9491

  基质胶(标准型、无酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9492

  基质胶(高浓度、含酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9493

  基质胶(高浓度、无酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9494

  基质胶(低因子、含酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9495

  基质胶(低因子、无酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9496

  基质胶(IPS验证无酚红)

  1.5ml*4

  现货

abs9497

  基质胶(高浓度、低因子、含酚红)

  1.5ml*8

  现货

abs9498

  基质胶(高浓度,无酚红,低生长因子)

  1.5ml*8

  现货


详见:
类器官原代培养全流程

爱必信(上海)生物科技有限公司
地址:上海市浦东新区新浩路58号申江科创园18栋
邮箱:zhouzz@absin.cn
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站