House Dust Mite Extract from D. pteronyssinus

描述

• 本品为从户尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus，Der p）全体中提取的天然变应原粗提物。户尘螨是全球主要的室内吸入性过敏原之一，约85%的过敏性哮喘患者对其存在特异性致敏。

• 尘螨提取物是构建哮喘体外细胞模型和体内动物模型的核心刺激物，相比于OVA（卵清蛋白）人工模型，尘螨模型能同时激活固有免疫+适应性Th2/Th17通路，更贴近人类哮喘的真实发病机制。

• 来源：户尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）全体

应用

• 酶联免疫吸附实验（ELISA）

• 蛋白免疫印迹（Western Blot）

• 体外细胞刺激

• 动物免疫实验

使用方法

• 本方案推荐来自文献，仅作为基础指导，具体实施时请参考多篇文献，依据您实验的具体要求进行修改。

• 一、体外细胞模型（以HNEpC为例）：

• 材料清单：细胞为原代人鼻上皮HNEpC；刺激物为Der p提取物、Der f提取物；混合组为15 μg/mL Der p + 15 μg/mL Der f（终浓度各半）；检测试剂盒包括LDH细胞毒性、PrestoBlue活力、炎症因子ELISA、qPCR引物（自噬/UPR/MMP/衰老）。

• 操作步骤：铺板培养，HNEpC接种至80%汇合度（约3 d），状态饱满、无漂浮物；尘螨刺激，分组（空白、Der p、Der f、混合），统一终浓度30 μg/mL，刺激24 h。若加药干预：尘螨刺激30 min后加入受试物共孵育24 h；收集样本，上清用于ELISA检测IL-1β、IL-6、IL-8、CXCL1、CCL2、VEGF、IL-10，细胞沉淀用于qPCR检测自噬（ATG3/5/7、Beclin1）、UPR（ATF6、CHOP、IRE1）、MMP（MMP2/9/12）、衰老（p21/p16/p27），细胞功能检测包括LDH（毒性）、PrestoBlue（活力）、β-半乳糖染色（衰老）。

• 模型成功标志：细胞活力下降，LDH释放升高（屏障损伤）；促炎因子（IL-1β、IL-6、CXCL8、CXCL1）升高，IL-10降低；自噬、UPR、MMP、衰老基因转录显著升高；β-半乳糖阳性衰老细胞大量增加。

• 二、体内小鼠哮喘模型（以BALB/c为例）：

• 基础材料：动物为5~6周龄雌性BALB/c（雌性炎症反应更稳定）；尘螨刺激物为Der p提取物或；给药方式为腹腔致敏+滴鼻激发（经典双阶段）；检测样本为BALF、肺组织、血清。

• 标准完整流程：第0、12天腹腔注射（尘螨+Al(OH)₃乳化），100 μg/只；第18~23天（每日1次）鼻腔滴入（生理盐水稀释），25 μg/只；第25~35天（隔日1次）鼻腔滴入（维持剂量），25 μg/只；第36天处死，取BALF、肺、血。仅做前两步只能得到急性炎症，无胶原沉积和重塑；要研究气道重塑，必须完成慢性间断强化步骤。

• 终点检测指标：肺功能（FlexiVent）乙酰甲choline梯度（6/12/24 mg/mL）刺激，测Rrs、Rn、G、H；BALF总细胞计数+分类（巨噬/淋巴/嗜酸/中性）；肺组织病理H&E（炎症评分）、PAS（黏液评分）、IHC（纤连蛋白、Ⅰ/Ⅴ胶原、MMP9/12/13）；肺匀浆ELISA检测IL-5、IL-13（Th2）、IL-17A（Th17）、IL-33、TSLP、MCPT-1、eotaxin；血清检测总IgE、尘螨特异性IgG1/IgG2a（Th2/Th1平衡）。

• 肺功能参数速解：Rrs（总气道阻力）和Rn（中央气道阻力）看气道堵塞程度；G（组织阻尼）看炎症粘滞性；H（组织弹性）是评估肺纤维化/僵硬的核心指标。

注意事项

• 本品为天然来源提取物，组分随螨虫原料批次存在一定差异，不同批次产品的免疫反应活性可能不同。建议在长期实验前进行批次一致性验证。

储存/保存方法

• 粉末-20°C储存，有效期2年。

运输方式

• 蓝冰运输