Fluo-8免洗细胞钙流检测试剂盒

1、细胞准备：
（1）正常培养基培养的细胞消化后，加培养基，细胞计数，取需要的细胞总数，离心。以下是按 96 孔板的建议用量，384 板需要的细胞数及体积，对应调整。96 孔培养板一般建议每孔细胞 20,000 左右。
（2）用 Hank’s 盐溶液或类似无酚红培养液，加胎牛血清至 1%浓度，用该培养液重新悬浮上述离心后的细胞。然后铺细胞于培养板，每孔 50 uL。细胞培养 3-5 小时至贴壁或过夜。
2、染料装载：
（1）取出缓冲液在室温平衡 30 分钟，颠倒混匀几次。如果缓冲液注明是 10x 浓缩液，需要用去离子水稀释成 1x 的工作缓冲液。
（2）取出 Fluo-8 试剂，室温平衡 5-10 分钟，离心将管内容物集中于管底。如果试剂不是一次性用完，可以对试剂进行分装，分装后的 Fluo-8 试剂继续-20℃保存，减少冻融次数。注意避光。
（3）计算好需要的染料装载液体积，按每孔 50 uL 计算。将 Fluo-8 试剂加于1x 的工作缓冲液，充分混匀。Fluo-8 试剂用量建议起始按 1:100 稀释到工作缓冲液中，稀释度可根据不同细胞株及需求调整。
（4）计算需要的储存液体积，加入到上述 Fluo-8 工作缓冲液中，充分混匀，此为装载液。
（5）吸去培养板孔中的培养液，将装载液加到细胞培养板孔，每孔 50 uL。轻轻振摇10 秒钟，加盖，37℃ 培养 1 小时。
3、细胞内钙流检测：
（1）准备化合物及激动剂：激动剂建议不少于 6 个浓度梯度。每反应板设立未加激动剂或化合物的对照孔。激动剂/化合物板每孔 100-200 uL体积。
（2）准备与检测仪配套的专用移液枪头盒。
（3）准备检测缓冲液：检测缓冲液是加了的 Hank’s 盐缓冲液。
（4）吸去培养板孔中的染料装载液，每孔加检测缓冲液 100 uL。
（5）设定好仪器检测程序及各相关参数，检测波长为 490/525nm，每 1-3 秒读1 次，连续读2 分钟。
（6）在加激动剂/化合物前读取一次基础读数。
（7）设定好化合物/激动剂板孔及枪头与实验细胞的对应位置。
（8） 启动加激动剂/化合物的检测程序，收集实验数据。
（9）用（F-F0)/F0 *100%的方法或其它被验证的方法进行数据处理分析。

未开封的缓冲液储存于 4℃，使用前需要取出在室温平衡 30 分钟，颠倒混匀几次。分装的缓冲液或 1 x 工作液可储存于室温（22℃）1 周。Fluo-8 试剂储存在-20℃ 或-80℃性能稳定1 年。