类器官冻存液

描述：

类器官冻存液（Organoid Cryopreservation Medium）可应用于多种哺乳动物（ 如人、 鼠） 来源的类器官和细胞系的低温长期保存。

使用方法：

1. 向回收后的类器官（或细胞） 中加入预冷的（2-8℃）类器官冻存液，吹打混匀后迅速转移至细胞冻存管中（冻存管内细胞悬液体积应大于 0.5ml）。注意： 每 1ml 冻存液推荐冻存 1x103-1x107 个细胞或对应细胞量的类器官。
2. 将冻存管放入细胞冻存降温盒内（降温盒须提前平衡至室温或 4℃），随后立即将降温盒放入-80 ℃超低温冰箱中；也可将冻存管进行人工梯度降温处理，如 4℃ 静置 10 分钟，-20℃保存 1 小时，-80℃保存过夜。
3. 次日或 12 小时后将冻存管于低温条件下（不高于-70℃，推荐使用干冰或原降温盒）转移至液氮中长期保存。

若类器官（或细胞）复苏，可按以下步骤进行：
1. 取10 ml类器官培养缓冲液 B于15 ml离心管。
2.  从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。
3.  水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2 分钟内融解。
4.  将溶解后的类器官细胞快速转移至15 ml离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300 g离心5分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官缓冲液 B重悬移入1.5 ml离心管300 g离心5 min。
5.  基质胶重悬，每孔25 ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15 min成胶，添加500 ul类器官培养基 A。

注：类器官冻存液（abs9519）可搭配类器官培养基使用。