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SP悬浮细胞核酸转染试剂盒

简要描述:该产品是专门用于悬浮细胞核酸高效转染的试剂盒。它具有非常好的转染性能,可高效转染绝大多数悬浮细胞,在部分悬浮细胞中,转染效率可高达85%以上(EGFP质粒)。

  • 产品型号:abs60325
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-03-05
  • 访  问  量:332

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详细介绍

品牌absinCAS-
分子式-纯度-
分子量-货号abs60325
规格0.5ml;1.0ml;1.5ml供货周期现货
主要用途专门用于悬浮细胞核酸高效转染的试剂盒应用领域化工,生物产业,综合

产品介绍:

该产品是专门用于悬浮细胞核酸高效转染的试剂盒。它具有非常好的转染性能,可高效转染绝大多数悬浮细胞,在部分悬浮细胞中,转染效率可高达85%以上(EGFP质粒)。其功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA,还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同, 该产品采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后 24 小时细胞几乎无明显死亡。使用也非常方便,先将转染试剂与质粒 DNA 混合,再将转染试剂-DNA 复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养液,操作十分简便。


产品特点:

1、较好的细胞转染性能:可高效转染多种悬浮细胞,转染效率可高达85%以上;

2、转染功能强大,不仅可高效转染大分子质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA;

3、极低的细胞毒性:使用可降解生物材料,细胞毒性低,转染细胞死亡率不到10%,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;

4、操作简便,可用于含血清培养基培养细胞的转染,转染前后不需要更换培养液。


操作步骤:


一、质粒DNA 转染(以24 孔板转染为例):


A、 细胞接种:

1、转染前一天或者两天接种细胞,接种细胞量为4-7×10 5 个;

2、确保转染时细胞比活度为90%以上,且生长状态良好;

3、如果细胞在转染前一天铺板,转染时可以不用换液,如果细胞在转染前两天铺板,转染时最好换液。


B、SP /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

1、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,再加入适量的转染试剂,见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并加入适量的溶液A,轻轻混匀,再加入适量的DNA,见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将DNA-培养基混合物滴加至SP-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。注意: SP-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。

注意:离心管最好使用聚丙烯离心管。


C、转染:

1、 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒,确保培养细胞分散成单细胞悬液,无细胞结团。

2、 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。

3、 培养24~96小时后观察或收获。

4、 SP在培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要,可以使用悬浮细胞培养专用的无血清培养基。

 

二、siRNA 转染(以24 孔板转染为例):


A、细胞接种:

1、转染前一天对细胞进行转接,使转染时细胞密度为30-50%左右,且生长良好、无支原体污染(非常重要);

2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。


B、SP /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):

1、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的siRNA(见下表),用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将siRNA-培养基混合物滴加至SP-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。


C、转染:

1、将拟转染细胞强烈振荡20-40秒,确保培养细胞分散成单细胞悬液,无细胞结团。

2、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。

3、37°C培养24-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6h时可以更换培养基,但不是必须。

4、SP在培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。


注意事项:

1、刚开始转染,请务必进行优化实验,如24孔板质粒转染,每孔质粒用量0.8ug,SP 可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染,SP 用量2ul,siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。

2、在制备DNA或siRNA转染复合物时,应避免制备体系中存在血清,因血清会干扰SP 与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素,抗生素会导致培养细胞死亡。

3、溶液A仅用于质粒转染,RNA或siRNA转染不需加入溶液A。

4、请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异,不要混用同一条件。

5、悬浮细胞转染难度大,且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响,研究者在转染之前,应查阅相关文献,认真准备转染方案,并对转染效果有比较理性的判断。

6、本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染,如需质粒DNA、siRNA共转,请选用核酸共转染试剂abs60317。


附表 1: 质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培养基、试剂、DNA量无血清培养基(μl)2x102x252x502x1002x2002x1000
溶液 A (μl)0.4124840
SP (μl)0.51.32.551050
1μg/μl plasmid (μl)0.160.40.81.63.216
培养基(ml)0.10.250.51210










附表 2:siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件

培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培养基、试剂、DNA量无血清培养基(μl)2x102x252x502x1002x2002x1000
SP (μl)0.4124840
siRNA (pmol)410204080400
培养基(ml)0.10.250.51210









保存方法:

-20°C 避光保存,有效期1年,使用前请轻轻混匀


技术指标:

货号SP溶液 A
abs60325-0.5ml0.5ml0.4ml
abs60325-1.0ml1.0ml0.8ml
abs60325-1.5ml1.5ml1.2ml


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