详细介绍
品牌 | absin | 货号 | abs60616 |
---|---|---|---|
规格 | abs60616 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 |
产品描述 | ||||||||||
描述 | NLuc荧光素酶是一种经基因工程改造的小分子酶(19.1kDa),是生物发光报告基因蛋白。 它比萤火虫(Photinus pyralis)或海肾荧光素酶亮约 150 倍,使用一种新型的腔肠素类似物(Furimazine) 可产生高强度、辉光型发光信号。该发光反应不依赖 ATP,同时通过抑制本底发光信号而获得最高的检测灵敏度。
| |||||||||
使用方法 | 1、自备材料: PBS;多道排枪;白色不透光/黑色细胞培养板;化学发光仪或酶标仪。 2、检测前准备: (1)预先将NLuc检测底物(50×)和NLuc检测底物缓冲液放置于室温。 (2)根据实际使用量,以1:50的比例将适量的NLuc检测底物(50×)与NLuc检测底物缓冲液混匀,室温避光备用。例如:如果需要10 mL反应液,则需要加入0.2 mL的检测底物。 注:建议现配现用,剩余的含有新型底物的反应液在当次实验结束后不建议留存。 3、操作方法: (1)从细胞培养箱中取出细胞培养板,放置5-15 min,恢复至室温。 注:使用白色不透光或者黑色的细胞培养板,减少孔间的信号干扰。 (2)加入检测溶液 使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的反应液,加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如,96孔板通常加入80-100μL 培养液,相应加入80μL-100μL检测溶液;384孔板通常加入20-30μL 培养液,相应加入20-30μL检测溶液。 (3)发光检测 混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NLuc荧光素酶报告基因活性。 注:为得到最佳检测结果,请在加入检测试剂后1小时内完成检测。 4、分析数据: (1)实验设计:根据不同实验目的,在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性,理论上每个实验组(包括对照组)都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。 ①空白对照组: 背景F:未转染细胞+反应液。 注:空白对照组的样品量必须与实验样品量相同,包含与实验样品相同的培养基/血清组合,并加上相同的检测试剂。 ②实验组:转染细胞经实验化合物处理(即实验组F)。 ③对照组:转染细胞不经处理,用以标准化结果(即对照组F)。 (2)计算结果: 实验组=实验组F-背景F。 对照组=对照组F-背景F。 表达倍数=实验组/对照组。 | |||||||||
储存/保存方法 | -20℃保存,有效期一年。NLuc检测底物(50×)建议分装-80℃保存。 | |||||||||
注意事项 | 1、酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25 ℃)再使用; 2、检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板,相邻孔之间会产生相互干扰; 3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同; 4、单管荧光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致; 5、为了您的自身安全,实验前请做好有效防护; |
产品咨询
电话
微信扫一扫