OCT包埋剂：冰冻切片的关键支撑者

实验台上，那块小小的组织如何在冷冻后能被切成薄如蝉翼的切片？答案就藏在一种名为OCT包埋剂的水溶性混合物中。

在免疫组化实验室中，研究人员通常会将组织样本平放于包埋盒内，加入适量OCT包埋剂浸没组织，随后将包埋盒缓慢平放入盛有液氮的容器内。

当包埋盒底部接触液氮开始气化沸腾，保持原位大约10-20秒钟，组织即迅速冻结，随后便可用于冰冻切片。这一过程依赖于OCT包埋剂的支撑，使柔软的组织能够变成适合切片的坚硬块状结构。

定义：什么是OCT包埋剂？

OCT包埋剂，英文全称为Optimal Cutting Temperature compound（较优切割温度化合物），是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物。又称为OCT冰冻切片包埋剂。

它已在免疫组化实验室中广泛应用，主要作用是在冰冻切片时支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。

OCT包埋剂为水溶性，在漂片时可溶于水，因此在后续的染色中不会增加背景染色。利用OCT混合物预先浸润组织，然后再进行恒冷箱切片，能够显著改善切片质量。从物理特性来看，OCT包埋剂具有适当的粘稠度，使组织与样品托有很强的黏附性。它在溶剂还未冻结时，仍为液体的情况下，可以适当移动标本，调整组织的固定方向。

图 OCT包埋剂(#abs9756)

核心功能：OCT包埋剂的作用原理

OCT包埋剂的核心功能是在冰冻切片时支撑组织。通过增加组织的连续性，它能有效减少皱折和碎裂，提高切片质量。

在切片过程中，OCT包埋剂使组织柔软易切，保持组织原有的形态和结构，这对于后续的观察和分析至关重要。由于其水溶性特性，在漂片时可溶于水，不会在样品和载玻片上留下残留物。这一特性避免了在后续染色实验中增加背景染色，确保了实验结果的准确性。

OCT包埋剂还能快速冷冻组织样本，使晶体形成的伤害最小化，从而保持样本的原始形态和结构，便于直接观察细胞和组织的形态学特征。

实践应用：OCT包埋剂的使用方法

1）标准包埋流程

根据上海交通大学医学院的实验动物饲养与管理指南，OCT包埋剂的标准包埋流程包括三个主要步骤。

1. 将放在蔗糖溶液中的组织块取出，放入20g L-1蔗糖与OCT包埋剂1：1体积比例混合液中，室温浸泡2小时。
2. 移入OCT包埋剂中室温浸泡4小时，更换新的OCT包埋剂，再室温浸泡6小时。
3. 将标本置于托物台，用恒冷箱切片机切片（一般-22℃），片厚10μm，贴于预处理的载玻片上，-20℃冰箱保存。

2）快速包埋方法

Absin则提供了更为快捷的包埋方法：

1. 将组织块平放于包埋盒内，加入适量包埋剂浸没组织。
2. 将包埋盒缓慢平放入盛有液氮的容器内，当包埋盒底部接触液氮开始气化沸腾时，即保持原位切勿浸入液氮中。
3. 大约10-20秒钟组织即迅速冻结，在组织冻结后，即可使用冰冻切片机进行切片。

3）使用注意事项

· 使用OCT包埋剂时，需注意滴加OCT包埋剂时要均匀，尽量避免气泡。
· 包埋时需注意切面的位置和样本的包埋方向。剩余OCT包埋块可做好标记于冻存管内-80度冷冻储存备用。
· 新鲜组织应在切除组织后的30分钟内进行OCT包埋制作冰冻切片。
· 对于不能及时处理的组织，可液氮速冻后-80度保存或经固定液固定后蔗糖脱水再进行OCT包埋。

广泛应用：OCT包埋剂的实验场景

OCT包埋剂最初是为冰冻切片而开发的，但它现在的应用范围已大大扩展。

1、免疫组化实验与浆膜腔积液细胞学检查

在免疫组化实验中，OCT包埋剂是不能少的材料，因为它能保持抗原性，不影响抗体结合。浆膜腔积液（胸水、腹水、心包积液等）脱落细胞学检查是病理科诊断恶性肿瘤的最重要方法之一。近年来，巧用OCT包埋剂可溶于水的性能，尝试将其作为浆膜腔积液离心沉淀后细胞的支架，再经过脱水、透明、浸蜡形成细胞块。这种方法操作简便，既富集了细胞，提高了恶性瘤细胞阳性检出率，同时也有利于恶性肿瘤类型的鉴别。

2、囊壁样组织处理

在囊壁样组织的处理中，利用OCT包埋剂进行冰冻切片能够较好解决此类组织的切片问题。研究表明，使用OCT包埋剂对囊壁样组织包埋后进行冰冻切片，能够快速完成切片，保持组织结构完整，染色清晰，诊断准确。

3、皮肤活检标本诊断

皮肤活检标本诊断中，使用冰冻切片直接免疫荧光法观察切片标本上荧光抗体染色结果作为抗原的鉴定和定位，OCT包埋剂也发挥了重要作用。

OCT包埋剂的更多潜力仍在发掘中。除了传统的组织切片，研究人员已开始将其巧用于浆膜腔积液细胞块制作，通过其水溶性作为细胞支架，再经脱水、透明、浸蜡形成细胞块，富集细胞，提高恶性肿瘤细胞阳性检出率。在每一个精准的诊断背后，都有这样默默无闻的实验支撑者。

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