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细胞上清外泌体提取试剂盒

简要描述:细胞上清外泌体提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

  • 产品型号:abs50040
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-21
  • 访  问  量:119

详细介绍

品牌absin货号abs50040
规格20T供货周期现货
应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合

描述:

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。本外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。


产品组分

组分名称规格保存
Exosome Concentration Solution(RNase/DNase Free, Sterile)100ml室温
Exosome Purification Filter
(RNase/DNase Free, Sterile)
20Tubes  室温








使用方法:

自备材料:
1、高速离心机(可达到 10000 g 离心力),涡旋振荡器; 2mL 离心转子;1.5 mL 离心管;
2、1×PBS 缓冲液(无菌); 


一、样品预处理:
 1、取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻,将wan全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
 2、样品初始用量:(单次提取时的样品量)  

样品名称 zui低量
细胞培养上清液20ml


 


3、离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于 4℃以 3000 g 离心 10 min,去除样品中的细胞碎片;(注:若沉淀较多,可 3000g/10min离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液)
 4、上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的 50mL 离心管中; 


二、提取外泌体:
 1、上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入 Exosome Concentration Solution(ECS 试剂),具体的加入剂量如下:(其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算)  

样品名称样品剂量加入ECS剂量
细胞培养上清液 20ml5ml




2、溶液混合:加入 ECS 试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1min,再放置于4℃静置至少2h;(增加静置时间可提高外泌体得率,但静置时间不可超过 24h)
3、沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于 4℃以 10000g离心 60min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4、外泌体重悬:取 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物(具体加入剂量如下表),待其溶解后,将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中; 

细胞上清样品体积 加入PBS剂量
20ml0.2ml


注:其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算
5、收获外泌体颗粒:将含有重悬液的 1.5 mL 离心管于 4℃以 12000 g 离心 2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
(注:若沉淀较多,可 12000 g /2min 离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液) 


三、纯化外泌体:
1、纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter(EPF 柱)上室中,于 4℃以 3000 g 离心 10 min,离心后收集 EPF 柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒;(注:EPF 柱不可重复使用)
 2、外泌体的保存: 纯化后的外泌 体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。  


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