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AO/PI双染试剂盒

简要描述:AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用AO/PI探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态,是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。吖啶橙为一种具有细胞膜通透性的荧光染料,该染料能透过活细胞膜,使核DNA和RNA染色。

  • 产品型号:abs9727
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-17
  • 访  问  量:155

详细介绍

品牌absin货号abs9727
规格100T供货周期现货
应用领域化工,生物产业,制药

描述:

 AO/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒是采用 AO/PI 探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态,是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种具有细胞膜通透性的荧光染料,该染料能透过活细胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。它与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,AO 与 dsDNA 结合时发出绿色荧光,而与 ssDNA 和 RNA 结合时发出红色荧光。当与 DNA 结合时,它与荧光素在光谱上非常相似,激发最大值为 502nm,发射最大值为 525nm(绿色)。当它与 RNA 结合时,激发最大值移至 460nm(蓝色),发射最大值移至 650nm(红色)。


在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。Propidium Iodide 是一种 DNA 结合性染料,其激发和发射波长分别为 488nm 和 630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。


应用:

流式细胞仪;激光共聚焦;荧光显微镜


使用方法:


1、试剂准备:
PBS 缓冲液(pH7.4)或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)


2、耗材准备
离心管、吸头、一次性手套 


3、染色工作液配制: 
(1) 根据样品数,按下列比例配制染色缓冲液。 取 100μL 试剂 C 用 900μL 纯水稀释,充分混匀即成染色缓冲液。 
(2)每 500μL 染色缓冲液加入 5ul AO 染色液和 10ul PI 染色液,充分混匀,即成染色工作液。 


4、悬浮细胞染色 
(1)收集样本细胞,细胞数量在 10X105 个以内。 
(2)用 PBS 洗涤细胞两次。 
(3)用 500μL 染色工作液将细胞重悬。 
(4)轻轻混匀后 4℃避光孵育 10-20 分钟。 
(5)用 PBS 洗涤细胞。 
(6)用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。 


5、贴壁细胞原位染色
(1)用 PBS 洗涤细胞 2 次。 
(2)细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。 
(3)37 ℃孵育细胞 10~20 分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用 20 分钟作为起始孵育时间,之后优 化体系以得到均一的标记结果。 
(4)吸干染色工作液,用培养基洗培养板或盖玻片 2~3 次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,然后吸干培养基。 

结果分析 : 
在荧光显微镜下,选用 488nm 激发光镜检: 
AO 染色正常细胞 DNA 呈均匀黄色或黄绿色,形态结构正常。 
当细胞凋亡时,染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染。 
坏死细胞呈强红色荧光。 


注意事项:

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3、本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以悬浮培养细胞的荧光显微镜检测为例,其他方法请参阅相关资料。
4、贴壁细胞可以消化下来染色,也可以直接原位染色。

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