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核酸转染试剂盒

简要描述:可高效转染绝大多数贴壁细胞,转染效率可高达90%以上(Hela细胞,EGFP质粒)。试剂A功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。

  • 产品型号:abs60259
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-10-20
  • 访  问  量:494

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详细介绍

品牌absinCAS-
分子式-纯度-
分子量-货号abs60259
规格0.5ml;1.0ml;1.5ml供货周期现货
主要用途专门用于核酸高效转染的试剂盒应用领域生物产业

产品介绍
该产品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基础上进一步研发成功的专门用于核酸高效转染的试剂盒。它具有非常好的转染性能,可高效转染绝大多数贴壁细胞,转染效率可高达90%以上(Hela细胞,EGFP质粒)。其功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。


与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同,该试剂盒采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后24小时细胞几乎无明显死亡。它使用也非常方便,先将转染试剂与质粒DNA混合,再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养液,操作十分简便。它适合于贴壁细胞的核酸转染,如需转染原代细胞,请选择原代细胞核酸转染试剂盒(abs60324)。如需转染悬浮细胞,请选择悬浮细胞核酸转染试剂盒(abs60325)。

产品特点:
1、强大的细胞转染性能:可高效转染多种贴壁细胞,转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上;
2、转染功能强大,不仅可高效转染大分子质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA;
3、极低的细胞毒性:使用可降解生物材料,细胞毒性低,转染细胞死亡率不到10%,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;
4、操作简便,可用于含血清培养基培养细胞的转染,转染前后不需要更换培养液。


试剂盒包装:

货 号试剂A试剂B
abs60259-0.5ml0.4 ml0.5 ml
abs60259-1.0ml0.8 ml1.0 ml
abs60259-1.5ml1.2 ml1.5 ml


转染效率:可高效转染多种贴壁细胞,转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上;
细胞死亡率:死亡率不到10%


操作步骤:


一、质粒DNA转染(以24孔板转染为例):

A、细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接,每孔接种0.8-1.2×105个细胞,使转染时细胞密度为90%左右,且生长良好(非常重要);
2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。


B、试剂B /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基,再加入适量的转染试剂,见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基,并加入适量的试剂A,轻轻混匀,再加入适量的DNA,见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、 将DNA-培养基混合物滴加至试剂B-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后,立即转染。注意: 试剂B-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。
注意:离心管最好使用聚丙烯离心管。


C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、培养12小时后即可观察,最佳观察或收获时间为24-48小时。
3、试剂B在培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。


二、siRNA转染(以24孔板转染为例):

A、 细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接,使转染时细胞密度为30-50%左右,且生长良好、无支原体污染(非常重要);
2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。


B、试剂B /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基,并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基,并添加适量的siRNA(见下表),用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、将siRNA-培养基混合物滴加至试剂B-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后,立即转染。


C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、37°C培养24-72小时,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6小时可以更换培养基,但不是必须。
3、 试剂B 在培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。


储存/保存方法:

-20°C 保存,使用前请轻轻混匀;有效期1年。


技术指标:

附表 1:质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培养基、试剂、DNA量无血清培养基(ul)2x102x252x502x1002x2002x1000
试剂A (ul)0.41.02.04.08.040
试剂B (ul)0.51.32.55.01050
1 ug/ul plasmid (ul)0.160.40.81.63.216
培养基(ml)0.100.250.501.02.010





附表 2:siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件


培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培养基、试剂、DNA量无血清培养基(ul)2x102x252x502x1002x2002x1000
试剂B(ul)0.41.02.04.08.040
siRNA (pmol)410204080400
培养基(ml)0.100.250.501.02.010




产品用途:

可高效转染绝大多数贴壁细胞,转染效率可高达90%以上(Hela细胞,EGFP质粒)。试剂A功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。


注意事项:

1、刚开始转染,请务必进行优化实验,如24孔板质粒转染,每孔质粒用量0.8 ug, 试剂B 可选择2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul进行优化。24孔板siRNA转染,试剂B 用量2.0 ul,siRNA用量可选10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol进行优化。
2、 在制备DNA或siRNA转染复合物时,应避免体系中存在血清,因血清会干扰试剂B 与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素,抗生素会导致培养细胞死亡。
3、试剂A仅用于质粒转染,RNA或siRNA转染不需加入试剂A。
4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异,不要混用同一条件。
5、如果需要质粒稳转,请在转染24-48小时后加入筛选培养基。
6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染,如需质粒DNA、siRNA共转,请选用核酸共转染试剂盒。
本产品仅用于科学研究,不得用于医学临床用途。


*温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究



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