核酸转染试剂盒

试剂盒组分

操作步骤：

一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）:

A、细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×105个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；
2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B、试剂B /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1、在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并加入适量的试剂A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、 将DNA-Trans buffer S混合物滴加至试剂B-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟，立即转染。注意： 试剂B-Trans buffer S混合物和DNA-Trans buffer S混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24-48小时。
3、试剂B在wan全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

二、siRNA转染（以24孔板转染为例）:

A、 细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B、试剂B /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1、 在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、 在1.5 mL无菌离心管中加入30 uL Trans buffer S，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、将siRNA-Trans buffer S混合物滴加至试剂B-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟后，立即转染。
C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、37°C培养24-72小时，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时可以更换培养基，但不是必须。
3、 试剂B 在wan全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

附表 1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

附表 2：siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件

1、shou次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8 ug， 试剂B 可选择2.0 uL、2.5 uL、3.0 uL、3.5 uL进行优化。24孔板siRNA转染，试剂B 用量2.0 uL，siRNA用量可选10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol进行优化。
2、进行质粒转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在80-90%为准，过高或过低均会影响转染效率。进行siRNA转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在30-50%为准。
3、试剂A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入试剂A。
4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5、如果需要质粒稳转，请在转染24-48小时后加入筛选培养基。
6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用核酸共转染试剂盒。
本产品仅用于科学研究，不得用于医学临床用途。