全国服务咨询热线:

15502157206

Products产品中心
首页 > 产品中心 > 常规生化试剂 > ELISA试剂盒 > abs9346细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒

细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒

简要描述:细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白、细胞浆蛋白、细胞膜蛋白与细胞骨架蛋白的方法。

  • 产品型号:abs9346
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-19
  • 访  问  量:126

详细介绍

品牌自营品牌供货周期现货
应用领域生物产业
产品描述
描述

        蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白、细胞浆蛋白、细胞膜蛋白与细胞骨架蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞浆蛋白、细胞核蛋白、细胞膜蛋白与细胞骨架蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western,EMSA,footprinting,报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒产品组分:

A

胞浆蛋白提取液

60mL

B

胞核蛋白提取液

10mL

C

膜蛋白提取液

6mL

D

结构蛋白提取液

6mL

E

磷酸酶抑制剂II(50×)

1mL

F

PMSF(100×)

1ml

使用方法
细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒实验流程:
1、试剂准备
1.1准备溶液
1.1.1室温融解试剂盒中的各种溶液,溶解后除结构蛋白提取液外,其他试剂立即置于冰上;
1.1.2 结构蛋白提取液溶解后,可放置于37℃水浴中温浴至透明后,常温放置。
1.2蛋白提取工作液的准备
1.2.1胞浆蛋白提取工作液的准备:临用前,根据处理样品的量估算实验时胞浆蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.2胞核蛋白提取工作液的准备:临用前,根据处理样品的量估算实验时胞核蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.3膜蛋白提取工作液的准备:临用前,根据处理样品的量估算实验时膜蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.4 结构蛋白提取工作液的制备:临用前,根据处理样品的量估算实验时结构蛋白提取液的需要量,并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。

2、对于培养细胞样品:
2.1胞浆蛋白提取
2.1.1加2.0ml(2.0×107细胞 )的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下震荡20分钟;
2.1.2准备1-5ml的注射器,用注射器吹打步骤1震荡过的溶液50-90次,在4℃条件下,15000g离心10分钟。取上清液存于EP管中,即为胞浆蛋白;
2.2胞核蛋白的提取取
2.1.2步骤获得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下15000g离心10分钟,弃去上清液,沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下15000g离心10分钟,上清液为细胞核蛋白,转入EP管并保存;
2.3胞膜蛋白的提取在步骤2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下15000g离心10分钟,上清液为细胞膜蛋白,转入EP管并保存。
2.4结构蛋白的提取在步骤2.3的沉淀物中加入常温或37℃水浴过的透明的结构蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells, 4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下15000g离心10分钟,保存上清液即为细胞骨架蛋白;
2.5待测蛋白的保存待检测浓度的蛋白存于-70℃。

3.对于组织样品:
3.1胞浆蛋白提取
3.1.1加2.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下研磨,重复匀浆两次,至全部溶解;
3.1.2在4℃条件下,震荡5分钟,18000g离心10分钟。取上清液存于EP管中,即为胞浆蛋白,沉淀物继续实验;
3.2胞核蛋白的提取在步骤3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下18000g离心10分钟,弃去上清液;沉淀物中加1.0ml/g冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下18000g离心10分钟,上清液为细胞核蛋白,转入EP管并保存;
3.3胞膜蛋白的提取在步骤3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下18000g离心10分钟,上清液为细胞膜蛋白,转入EP管并保存;
3.4结构蛋白的提取
3.4.1在步骤3.3中的沉淀物中加入常温或37℃水浴过的透明的结构蛋白提取工作液0.5ml/g,震荡5分钟,4℃条件下18000g离心10分钟,保存上清液;
3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰冻的胞浆蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟,4℃条件下18000g离心10分钟,保存上清液;
3.4.3混合前两步的上清液,此为骨架蛋白;
3.5待测蛋白的保存:待检测浓度的蛋白存于-70℃。
储存/保存方法
-20℃保存,一年有效。
注意事项
1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。建议可适当分装后使用;
2、所有接触样品的用具及试剂均需预冷。裂解蛋白的所有步骤都需在冰浴或4℃进行;
3、试剂盒50T是按照6孔板的单孔细胞量计算,实际使用中本套试剂足够处理5g组织,或者1.25×108细胞,最少细胞不宜少于0.1g组织或者2.5×106
4、结构蛋白提取液含有SDS,使用中如有沉淀水浴加热溶解即可。
为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
爱必信(上海)生物科技有限公司
地址:上海市浦东新区新浩路58号申江科创园18栋
邮箱:zhouzz@absin.cn
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站