胶原酶 II型

溶组织梭菌

活性>125CDU/mg

使用方法：
一、储存液制备：
1、直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保wan全溶解混匀。
2、根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。
3、立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。
4、使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。
二、组织分离：
1、用无菌手术jian或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；
2、加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；
3、37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4、将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
5、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6、低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
三、器官灌注：
1、将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2、按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；
3、将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
4、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
5、低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

2-8℃干燥保存，可置于-20℃长期保存，2年有效。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

棕褐色或淡褐色粉末