聚凝胺溶液：多功能阳离子聚合物在生物医学研究中的应用

在基因功能研究、病毒转染和输血安全检测等领域，聚凝胺（Polybrene）作为一种多聚阳离子聚合物，已成为不ke或缺的实验试剂。

这种名为溴化己二甲铵的化合物，通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒间的静电排斥，显著提升基因转染效率，是逆转录病毒和慢病毒转染的标准增强剂。

01 化学特性与作用机制

聚凝胺，化学名称为溴化己二甲铵（hexadimethrine bromide），CAS号为28728-55-4。

它是一种多聚阳离子聚合物，分子式为(C13H30Br2N2)n。

聚凝胺在25℃水中的溶解度可达100 mg/mL，DMSO中也可达5 mg/mL，表现出良好的水溶性。

该试剂稳定性较强，需在-20℃避光保存，并避免反复冻融。

聚凝胺的核心作用机制是电荷中和。它通过正电荷与细胞膜表面唾液酸糖蛋白的负电荷相互作用，中和细胞与病毒颗粒间的静电排斥。

这种电荷中和作用可增强病毒颗粒（如慢病毒、腺病毒）对宿主细胞的吸附效率，使逆转录病毒转导效率提高3-10倍。

在脂质体转染中，其通过促进DNA-脂质体复合物与细胞膜融合提升转染成功率。

02 应用领域与实验场景

基因转染增强

作为病毒载体转染的标准添加剂，聚凝胺在慢病毒感染实验中通常以2-10μg/mL浓度使用，常用浓度为5μg/mL。

它特别适用于贴壁细胞系的转染效率提升，但对Jurkat等悬浮细胞系效果有限。

在DNA转染中，与脂质体按1：2000比例配合使用可增强CHO等难转染细胞系的基因导入效果。

使用流程包括：制备含1×10^6感染单位的病毒原液，接种80%密度的靶细胞，添加5μg/mL聚凝胺后37℃孵育8小时。

临床输血检测

聚凝胺配血法是目前交叉配血最li想的方法，能迅速检出大多数意外血型抗体。

该方法可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的绝大多数抗体。

其原理是聚凝胺作为一种四胺聚合物，可中和红细胞上的负电荷，降低Zeta电位，缩短细胞间距离，形成一种可逆性非特异性的红细胞凝聚现象。

当加入重悬液后，聚凝胺引起的非特异性凝集会散开，而真正的抗原抗体结合产生的凝集不会散开。

抗肝素作用

聚凝胺能快速中和肝素的抗凝血活性，通过诱导红细胞非特异性凝集用于肝素活性检测。

该特性使其在临床检验中作为抗肝素剂使用，反应体系中推荐浓度为2-10μg/mL。

蛋白测序优化

在PVDF膜处理过程中，添加微量聚凝胺可改善膜亲水性，降低多肽机械损伤，提高蛋白质结合效率。

实验数据显示，该处理可使Edman降解测序的肽段回收率提升15-20%。

03 实验操作指南

溶液配制

聚凝胺可用0.9% NaCl配置成5 mg/ml的储存溶液，并用0.22μm滤膜过滤除菌。

配制后的溶液应适当分装后-20℃保存，避免反复冻融。

典型使用流程

慢病毒感染流程：制备含1×10^6感染单位的病毒原液，接种80%密度的靶细胞，添加5μg/mL聚凝胺后37℃孵育8小时。

脂质体转染：需将聚凝胺与质粒DNA按1：1000比例混合，转染后6小时进行DMSO休克处理。

聚凝胺配血法：取试管2支，标主次侧，主侧管加患者血清（血浆）2滴，加供血者3%～5%红细胞悬液1滴，次侧管反之。

各加低离子介质（LIM）0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，混合均匀后离心，观察结果。

毒性控制

该试剂对神经元、树突状细胞等敏感细胞具有显著毒性，使用前需通过0.1-20μg/mL梯度实验确定zui大安全浓度。

研究显示，超过10μg/mL的浓度会诱导NIH3T3细胞凋亡率增加。

对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。

04 注意事项与替代方案

使用聚凝胺时，需注意其对特定细胞类型的毒性。对于敏感细胞，如神经元、树突状细胞等，需要精确优化使用浓度。

自2000年代起，硫酸鱼精蛋白（PS）逐渐替代聚凝胺用于原代T细胞、造血干细胞等敏感细胞转染。

但聚凝胺在HEK293T细胞系转染及LentiBOOST复合增强剂中仍保持不可替代性。

聚凝胺可能对人体有一定的毒害作用，操作时需穿戴防护装备，以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。

05 发展历史与未来展望

聚凝胺于1971年首ci被报道可提高鼠白血病病毒转导效率，2005年后成为基因治疗标准试剂。

随着新型无毒增强剂开发，其应用比例从2010年的78%下降至2022年的42%，但在基础研究领域年引用量仍超过68篇。

目前，聚凝胺在临床输血检测领域的应用持续扩大，其在高灵敏度抗体检测中的价值日益凸显。

未来，随着基因治疗和细胞疗法研究的深入，聚凝胺作为经典转染增强剂，仍将在特定领域发挥重要作用。

聚凝胺溶液在科研中的应用远不止于此。随着基因治疗研究的深入，这种阳离子聚合物正在病毒载体制备和干细胞工程中展现出新的价值。

当你下次在显微镜下观察到成功转染的细胞时，不妨回想一下这个在幕后默默发挥作用的隐形助手。

正如实验中的许多常用试剂一样，看似简单的聚凝胺溶液，背后却蕴含着不简单的科学原理与应用智慧。

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