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抗体选择全指南之抗体小知识

更新时间:2024-07-02      点击次数:189

在实验室常用的免疫学实验中,抗体是不ke或缺的试剂之一。合适的抗体能提高我们的工作效率,节约时间。一旦抗体选得不合适,可能会事倍功半,甚至导致实验失败。到底怎样才能选到合适的抗体呢?小爱特地推出《抗体选择zui全指南》专题,专题会包含五篇文章:抗体小知识、抗体选择的基本原则、WB抗体如何选择、IHC/ICC/IF抗体如何选择以及质谱流式(CytoF)抗体如何选择,帮助大家梳理一下抗体选择的知识和技巧,今天给大家带来第一篇:抗体小知识。


抗体的结构


抗体以一个或者多个Y字形单体存在,每个Y字形单体由4条多肽链组成,包含两条分子量较大的重链(Heavy chain,H)和两条分子量较小的轻链(Light chain,L)。重链包含1个可变区(VH)和3个恒定区(CH),轻链包含1个可变区(CH)和1个恒定区(CL)。相邻的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)形成抗原结合位点。Fc段可以直接结合酶或者荧光染料,是结合二抗、补体以及Fc受体的区域。


抗体选择全指南之抗体小知识

图 抗体的结构 (图片来源于优宁维网站)


抗体的同种型


抗体根据重链的不同,可分为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五种类型。同一类免疫球蛋白根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别,又可分为不同的亚类。IgG可分为IgG1~IgG4;IgA可分为IgA1和IgA2。IgM、IgD和IgE尚未发现有亚类。


添加抗体五种类型


抗体选择全指南之抗体小知识

抗体选择全指南之抗体小知识

(图片来源于优宁维网站


特点

IgG

IgM

IgA

IgE

IgD

重链

γ

μ

α

ε

δ

轻链

κ或λ

κ或λ

κ或λ

κ或λ

κ或λ

Y结构

单体

五聚体

单体、二聚体或三聚体

单体

单体

效价

2

10

2,4,6

2

2

血清中浓度

8-16mg/mL

0.5-2mg/mL

1-4mg/mL

10-400ng/mL

0-0.4mg/mL





多抗、单抗和重组抗体


抗原可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表位。一个抗原可以有多种不同的抗原决定簇,机体也可以相应产生不同的抗体。按照生产抗体的技术不同,抗体可分为多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体。


最先出现的是多克隆抗体(polyclonal antibody,简称pAb),它是用抗原免疫高等脊椎动物,比如兔、山羊等得到的。多抗可识别多个抗原,它的优势是制备简单,成本较低,灵敏度也高;但是这种制备方法每次都要使用动物,批间差会比较大,非特异性背景一般相对较高,不过这也不是绝对的,也有一部分多抗很好用。


单克隆抗体(monoclonal antibody,简称mAb)是第二代抗体,它是用杂交瘤技术产生的抗体,只识别抗原的一个特定表位,相对多抗来说特异性更高,背景更低。最开始只有小鼠单抗,最近几年兔单抗兴起,总体而言,兔单抗较鼠单抗有更高的特异性和灵敏度,亲和力更强,而且识别抗原表位更丰富,包括短肽,小分子,点突变以及翻译后修饰(PTMs)等。


抗体选择全指南之抗体小知识

图片来源于优宁维网站

最新的第三代抗体是重组抗体(recombinant antibody),重组抗体的最大特点是编码抗体蛋白质的氨基酸或DNA序列是已知的。通过重组DNA等技术,将编码重组抗体的基因序列插入至表达载体,并将它转入至表达宿主中(如哺乳动物细胞、酵母或细菌),进而表达纯化获得。它的优势是批间差异极低,特异性更高,生产时间更短,但是相对来说需要更高的技术,开发和生产的成本也比较高。


抗体选择全指南之抗体小知识


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抗体的分子形式


抗体选择全指南之抗体小知识

图 抗体的分子形式 (图片来源于优宁维网站)


Fab和Fc片段:木瓜蛋白酶对抗体进行消化,会形成两个Fab(抗原结合)片段和一个Fc片段。

F(ab’)2片段:胃蛋白酶对抗体进行消化,会形成F(ab’)2片段包含两个Fab和铰链。


学后自测题


1、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb这个抗体的名称中,Ser473及mAb代表什么意思?

答案:Ser473是抗体检测的磷酸化位点,mAb代表单抗


2、Goat anti-Mouse IgG(H+L)-HRP Antibody这个抗体名称中,H+L代表什么意思?

答案:H代表Heavy chain即重链,L代表Light chain即轻链,H+L代表这个抗体能识别小鼠IgG的整个分子。


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