全国服务咨询热线:

15502157206

article技术文章
首页 > 技术文章 > ELISA检测中的OD值知多少?

ELISA检测中的OD值知多少?

发布时间:2020-12-14      点击次数:2424

“OD值”这个概念想必做实验的各位小伙伴们都不陌生,从判断提取核酸的质量及浓度,到BCA蛋白定量进行蛋白定量,又或者是ELISA实验检测目的蛋白含量,这些常用的基础实验都需要检测样品的“OD值”,但是,“OD值”到底是个什么东西,我们在测量“OD值”的时候又有哪些需要注意的问题,今天就让小编给小伙伴们好好说道说道。
 

什么是“OD”值?

OD全称optical density,也就是光密度,也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱,来鉴别物质或者测定物质的含量,也就是将一束特定波长的光通过被检测物,被检测物可以将光吸收掉一部分,通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。


了解了“OD值”是什么之后,接下来我们再看看在不同的实验中测量“OD值”有哪些需要注意的。

需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时提到,吸光度利用的是物质特有的吸收光谱,实际操作中我们需要注意的关键的也是这一点,不同物质的吸收光谱不同,大吸收峰的波长也不同,为了达到好的测量效果,一般来讲,我们需要在待测物质的大吸收波长处来检测其“OD值”。例如,核酸在260nm波长处光吸收大,而蛋白和酚类物质则在280nm波长处光吸收大;BCA法检测蛋白含量时,显色反应后,溶液由浅绿色变为紫色,此时在560nm处有大光吸收值;TMB法显色的ELISA实验,在加入终止液后溶液由蓝色变为黄色,在450nm处有大光吸收。
 

除了吸收波长,一些实验还需要设置校正波长,校正波长往往远离大吸收波长,作为本底吸收,排除由于气泡、灰尘等其他系统误差造成的“OD值”偏差。根据测得的“OD值”,进行双波长校正,可以有效的减少系统误差造成的影响。


对于测量得到的待测样本“OD值”还需要进行换算才可以得到终的浓度,有很多小伙伴往往在这一步出现错误,功亏一篑。需要注意的地方也比较简单,就是根据对应试剂盒的说明书,采用推荐的曲线拟合方式进行拟合,拟合后需要看一下拟合曲线的R2值,约接近1证明曲线拟合度越高,结果越可信。如果R2值较低,则需要检查是否出现标准品稀释问题或实验操作出现失误。拿爱必信的试剂盒来举例,BCA 蛋白定量试剂盒(abs9232),此款试剂盒推荐的标曲拟合方式就是直线拟合,而ELISA试剂盒系列产品,则推荐用四参数拟合方式进行标曲拟合。选择错误的拟合方式,会影响曲线拟合度,R2值较低,回归计算的待测样品浓度也不准确。温馨提示:BCA蛋白定量实验以及ELISA实验的显色过程都是受反应时间及温度等条件影响的,需要根据实验情况及时终止实验进行读数,做实验时尽量不要走开哦~
 

关于“OD值”本期就先分享到这,看到后的小伙伴们还有福利,小编在这里把一款小巧的曲线拟合软件ELISA Calc分享给大家,常见的曲线拟合方式都在里面,帮助大家测好“OD值”,得到好结果。

以下是absin近期热门ELISA相关产品:

货号产品名称规格价格
abs510001 Human IL-2 ELISA Kit 96 T 2000
abs510002 Human IL-1 beta ELISA kit 96 T 2000
abs510003 Human IL-6 ELISA Kit 96 T 2000
abs510006 Human TNF-α ELISA Kit 96 T 2000
abs510007 Human IFN-gamma ELISA Kit 96 T 2000
abs510008Human VEGF ELISA Kit96 T 2000
abs510009 Human EGF ELISA Kit96 T 2000
abs510010 Human MMP-9 ELISA Kit 96 T 2000
abs510011Human IL-12/IL-23 p40 ELISA Kit96 T 2000
abs510012 Human IL-12 p70 ELISA Kit 96 T 2000

 

相关产品推荐:

ELISA试剂盒

BCA 蛋白定量试剂盒

组织/细胞裂解液 (多因子检测)

 

Absin特色产品线(全部现货):
WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

爱必信(上海)生物科技有限公司
地址:上海市浦东新区新浩路58号申江科创园18栋
邮箱:zhouzz@absin.cn
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站