霍乱毒素B亚单位-FITC偶联物

产品描述

• 霍乱毒素B亚单位（Cholera Toxin Subunit B，简称CTB）是霍乱肠毒素的重要组成部分，而霍乱肠毒素是霍乱弧菌分泌的主要致病因子。天然霍乱毒素采用AB5毒素结构模式，由一个具有酶活性的A亚单位和五个相同的B亚单位非共价结合形成的环状五聚体。该产品为重组形式，通过基因工程技术单独表达B亚单位，不含具有毒性的A亚单位，既保证了实验安全性，又不影响其功能特性。

• CTB的核心功能机制在于其能够特异性识别和结合细胞膜上的GM1monosialotetrahexosylganglioside。GM1monosialotetrahexosylganglioside是一种广泛分布于真核细胞膜上的糖鞘脂，特别在神经元胞体、树突以及上皮细胞表面富集。CTB与GM1的结合具有高度亲和力和特异性，这种结合特性是其多种应用场景的分子基础。CTB可以在不引起细胞毒性反应的前提下，利用CTB的膜结合能力进行多种研究。

• 脂筏（lipid raft microdomains，LR）是细胞膜上富含鞘脂类的微结构域，被认为在细胞信号转导、膜运输和细胞极性建立中发挥关键作用。由于GM1monosialotetrahexosylganglioside是脂筏的标志性成分，CTB与GM1的高亲和力结合使其成为脂筏的天然标记物。FITC-CTB是用异硫氰基荧光素（FITC）标记的CTB产品，可用于脂筏的特异性标记。此外，还可以定制AF488/AF594/AF647等小分子荧光素标记的CTB。

应用

• 细胞膜脂筏标记

浓度

• 1mg/mL（Buffer：1×PBS，pH 7.4）

使用方法

• 以下方案适用于对1个2 mL体系、浓度为1×10⁶个/mL的悬浮活细胞样本进行标记。对于在18 mm×18 mm盖玻片上生长至亚汇合度（70%-80%）的贴壁细胞，也可使用相同体积的试剂进行标记。若需标记多个样本，可按比例扩大试剂用量；若孵育体积小于2 mL，可按比例减少试剂用量。

• 细胞洗涤：将细胞离心，用预冷的1×PBS（pH 7.4）轻轻重悬细胞沉淀。

• CTB孵育条件：

• 浓度优化：CTB-FITC（1mg/mL）推荐工作浓度5-10 μg/mL（不同细胞类型最适浓度有差异，需预实验确定，过高浓度增加背景），工作液可用无菌1×PBS稀释（pH 7.4）。

• 孵育时间与温度：4°C孵育30分钟（减少内吞作用，保持膜表面GM1标记）。若需标记内化GM1，可改为37°C孵育15-30分钟。孵育结束后，用预冷的1×PBS（pH 7.4）轻轻洗涤细胞数次。

• 避光操作：CTB-FITC对光敏感，全程避光。

• 封片与观察标记细胞：若细胞无需用醛类固定以进行长期储存，也无需固定后用去污剂透化以进行后续标记步骤，则可直接进行此步骤；否则跳过此步骤，继续进行固定步骤。将细胞置于预冷的1×PBS（pH 7.4）中封片，使用合适的滤光片组通过荧光显微镜观察细胞。

• 固定（可选）：将细胞置于含4%甲醛的预冷1×PBS（pH 7.4）中，在4°C条件下固定15分钟，避免醛类过度交联破坏脂筏结构。甲醇/丙酮等有机溶剂固定会溶解脂筏，不可使用。若细胞无需去污剂透化，可直接进行封片与观察。洗涤：固定后用1×PBS（pH 7.4）轻柔洗涤3次，防止脂筏破坏。

• 透化细胞（可选）：脂筏的标记不建议透化处理，如实验中无法避免透化，可尝试将固定后的细胞置于含0.1% Saponin的1×PBS（pH 7.4）中，在室温下透化10分钟。透化结束后，用1×PBS洗涤细胞1次。

• 封片与观察固定后的细胞：使用适宜的封片剂对固定后的细胞（或固定并透化后的细胞）进行封片，然后使用合适的滤光片组通过荧光显微镜观察细胞。

注意事项

• 甲醇/丙酮等有机溶剂固定会溶解脂筏，不可使用。

• CTB-FITC对光敏感，全程避光操作。

• 脂筏的标记不建议透化处理。

储存/保存方法

• -20℃保存，有效期12个月。避免反复冻融。

运输方式

• 干冰运输