Amyloid β-Peptide (1-42) (human)

产品描述

• 人源β-淀粉样蛋白（1-42）是一条由42个氨基酸残基构成的脑渗透性多肽片段，常用于阿尔茨海默病及唐氏综合征的相关研究。本品为未经HFIP预处理的冻干粉末，用户可根据实验需要自行HFIP处理。在单体状态下，该肽段表现出一定的神经保护功能；而在体外经HFIP和DMSO处理后，其聚集状态直接决定毒性效应：当于4℃条件下孵育时，形成可溶性寡聚体（ADDL），这类寡聚体具有显著的突触与神经毒性，能够通过结合PrPc、mGluR5、NMDA等神经元表面受体，诱发氧化应激反应和钙离子稳态失衡，最终导致神经元死亡。相比之下，在37℃孵育下产生的不溶性纤维体毒性较低，其作用主要表现为介导氧化损伤。

• 来源：合成（Synthetic）

• 序列：H- Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-OH

• 纯度：大于95%

应用

• 阿尔茨海默病研究

• Aβ42寡聚体的制备

• Aβ42纤维体的制备

技术指标

• 该产品以TFA盐的形式提供

使用方法

• 单体制备：

• 多肽起始状态：固体Aβ42多肽应保存于-20℃。准备制备多肽薄膜时，将冻干粉从冰箱取出置于冰上，待温度平稳后再开盖操作。

• HFIP预处理：将HFIP置于冰上冷却，并在通风橱内操作。注意：HFIP具有强腐蚀性和挥发性，需在良好通风条件下使用。向固体Aβ多肽中加入足量预冷的HFIP，使其终浓度为1 mM（例如：向1 mg Aβ42中加入222μL HFIP）。

• 孵育：室温下密闭孵育至少60分钟。溶液应澄清无色。如有少量不溶物，可延长HFIP处理时间（如过夜孵育）、涡旋震荡、或辅助短时间超声；如仍有少量不溶物，建议离心或过滤去除。

• 再次冷却：将肽-HFIP溶液放回冰上，冷却5–10分钟。

• 分装：将溶液分装至低吸附微量离心管中（例如：111 μL分装量相当于0.5 mg Aβ42），请勿盖紧管盖。

• 去除HFIP：真空干燥去除所有HFIP。如果没有真空干燥条件，可以尝试氮吹，不建议冷冻干燥或置于通风橱内自然挥发。处理完成后，多肽应在管底形成一层薄而透明的膜；不应呈白色粉末或块状。

• 保存：将装有肽膜的离心管置于含干燥剂的密封容器中，-20℃可稳定保存1个月，-80℃可稳定保存6个月。避免反复开盖吸潮。

• 寡聚体（ADDL）制备：

• 取肽膜：将按前述方法制备的干燥肽膜从-20℃冰箱中取出，置于冰上，待温度平稳后再开盖操作。

• 配制母液：向0.5 mg肽膜中加入22.2 μL新鲜无水DMSO。用移液器反复吹吸并冲洗管壁，确保肽膜溶解。所得DMSO母液应澄清无色。注：DMSO极易吸潮，建议每次制备使用新鲜包装的无水DMSO。

• 稀释至工作浓度：将5 mM肽母液用预冷的无血清细胞培养基（如F12、DMEM）或低离子强度缓冲液（如10 mM Tris，pH 7.4）稀释至所需浓度。为获得最佳产率，ADDLs溶液的终浓度不宜超过100 μM（例如：取20 μL 5 mM肽母液，迅速加入到980 μL预冷的无血清F12培养基中）。注意：5 mM DMSO母液需新鲜配制，不得以DMSO母液形式保存，否则将形成原纤维。

• 混合处理：稀释后立即盖紧管盖，在涡旋振荡器上以最高速度剧烈涡旋30秒。

• 孵育：将样品置于4℃条件下孵育24-48小时，使其形成稳定的寡聚体。

• 收集ADDL：孵育结束后，4°C下14000 g离心10分钟；小心吸取上清液转移至新的离心管中。所得上清液即为富含ADDL的储备液，底部的少量沉淀（无效聚集物）必须丢弃。建议通过BCA法或UV280测定储备液蛋白浓度，再根据实验需求稀释用于实验。

• 纤维体制备：

• 取肽膜：将按前述方法制备的干燥肽膜从-20℃冰箱中取出，置于冰上，待温度平稳后再开盖操作。

• 配制母液：将肽膜溶于无水DMSO配成5 mM母液，取适量母液用10 mM HCl稀释至目标浓度（如100 μM），涡旋混匀。

• 孵育：将溶液在37°C下陈化24-48小时，得到Aβ42纤维体。为保持最佳的生物活性，纤维体溶液建议现配现用。

注意事项

• PBS中的高盐浓度（尤其是磷酸根和氯离子）会诱导Aβ42寡聚体聚集沉淀，若使用PBS稀释，可能会导致多肽析出。

• 寡聚体和纤维体在溶液中不稳定，建议现配现用。如需储存，建议以薄膜形式的肽储存在-20°C或-80°C。

常见问题解答

• Q1：如何选择制备Aβ42单体、寡聚体(ADDL)还是纤维体？各自的用途是什么？
  A1：单体：经HFIP处理并干燥成膜后，溶于无DMSO的缓冲液（如10 mM NaOH）即刻使用，常用于结构分析或作为聚集起始点。ADDL（寡聚体）：按说明书寡聚体（ADDL）制备方法（4℃孵育），具有突触毒性，用于细胞模型或机制研究。纤维体：按纤维体制备方法（37℃孵育），毒性相对较低，常用于病理沉积模型或材料表面修饰。三种形式的生物活性差异极大，务必根据实验目的选择正确制备路径。

• Q2：为什么不建议用PBS稀释DMSO母液来制备ADDL？
  A2：PBS中的高浓度盐离子（Na⁺, K⁺, PO₄³⁻, Cl⁻）会强烈诱导Aβ42快速聚集形成无序聚集体或纤维，而非均一的寡聚体（ADDL）。建议使用低盐、无血清培养基（如F12、DMEM）或低离子强度缓冲液（如10 mM Tris，pH 7.4）。若需在PBS中使用，建议先稀释到低盐缓冲液，再用PBS稀释，但会显著降低产率。

• Q3：HFIP处理后的肽膜可以保存多久？如何保存？
  A3：在干燥、密封、含干燥剂的容器中，-20℃可稳定保存1个月，-80℃可稳定保存6个月。避免反复开盖吸潮。使用时取出一管，平衡至室温后再打开，防止冷凝水进入。

• Q4：为什么5 mM DMSO母液不能保存？最多能放多久？
  A4：Aβ42在高浓度DMSO（大于1%）中会逐渐形成β-折叠结构，即使几小时内也会开始聚集。必须新鲜配制，溶解后立即稀释至工作液，不可将母液冷冻或冷藏备用。建议每次只溶解一次实验所需的肽膜量。

• Q5：如何验证我制备的ADDL确实是寡聚体而不是纤维或单体？
  A5：推荐以下方法（任选其一）：ThT荧光：ADDL不结合ThT（低信号），纤维体结合强（高信号）。非变性凝胶电泳（Native PAGE）：ADDL表现为30-100 kDa弥散条带，单体约4.5 kDa。原子力显微镜（AFM）：ADDL呈球形颗粒（直径5-15 nm），纤维体呈长丝状。Western Blot：使用A11抗体（特异性识别寡聚体）或6E10抗体（识别所有形式）。

• Q6：制备的ADDL可以直接用于动物脑内注射吗？
  A6：可以，但需注意：注射前应将ADDL储备液稀释于无菌、无内毒素的PBS或人工脑脊液中（4℃预冷）。建议使用新鲜制备的ADDL，并在4℃保存，避免反复冻融。注射前14000g离心5分钟，去除可能形成的大聚集物，只取上清。推荐剂量：每侧海马注射2-5 μg（基于蛋白总量）。使用建议进行剂量梯度预实验。

储存/保存方法

• 粉末-20°C储存，有效期2年。配置成溶液后，请尽快使用，最好现配现用。

运输方式

• 蓝冰运输

•