百日咳毒素

描述

• 百日咳毒素（Pertussis toxin，PTX）由百日咳鲍特菌（Bordetella pertussis）代谢纯化所得，是一种多亚基毒素，可与大多数哺乳动物培养细胞结合并特异性靶向G蛋白，抑制G蛋白及其在信号通路中的生理功能。PTX的生理效应因G蛋白功能不同而变化；正是依赖Gi家族蛋白偶联受体抑制信号通路的能力，使其成为细胞生物学研究中的重要工具。同时，PTX通过抑制和调节宿主对百日咳鲍特菌的多种免疫反应，在感染过程中发挥重要作用。

• PTX是构建实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的关键辅助剂，该模型是研究多发性硬化症（MS）常用的动物模型。PTX通过与髓鞘特异性抗原联合注射，可显著提高EAE模型的诱导成功率。

应用

• EAE模型免疫增强剂

• Gαi抑制剂

质量指标

• 纯度：大于99%，无盐

• 活性：本产品尚未激活，复溶后可直接使用，无需额外激活步骤。

使用方法

• 本方案为通用基础指导，仅供实验参考。EAE模型的建立受动物品系、周龄、性别、抗原种类与剂量、弗氏佐剂（FCA）组成、PTX剂量与给药时点、免疫途径及检测终点等多因素影响，不同文献的免疫原剂量（MOG 35-55 100-300 µg/只）与PTX用量（100–1000 ng/只）差异较大，且模型类型随品系–抗原组合而改变（C57BL/6 + MOG35-55多呈单相病程，SJL + PLP139-151多呈复发–缓解型）。具体实施时，建议结合多篇文献及预实验结果，依据您的实验目的对剂量与时间点进行相应调整。

• 以常用的C57BL/6 + MOG35-55组合为例：将免疫原性表位MOG35-55悬浮于含高浓度热灭活结核分枝杆菌H37Ra的FCA中充分乳化后免疫，并于免疫当天及免疫后48小时注射PTX。C57BL/6小鼠在免疫后10–14天出现经典自限性单相EAE，表现为进行性上升性神经功能缺损，急性期表现为弛缓性瘫痪，之后疾病进入平台期并开始自限性恢复。

实验操作流程

• 实验动物：通常选择6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠。每组至少需要10只动物以确保统计学意义。

• 动物适应：将动物在实验环境中适应1周，保持温度、湿度和光照条件稳定，并使它们能够自由获取食物和水。

• EAE模型建立：

• PTX溶液配制：取50 μg百日咳毒素冻干粉，加入500μL ddH2O复溶。轻轻混匀至溶解。严禁涡旋震荡或无菌过滤，以免蛋白损失。分装后于4°C保存。此时浓度为100 μg/mL（即100 ng/μL）。免疫当天，用无菌PBS将储备液稀释50倍，得到浓度为2 ng/μL的PTX工作液，现配现用。

• MOG (35-55)工作液配制：精确称取MOG (35-55)多肽粉末，先加入适量ddH₂O溶解，配制成较高浓度的储备液，待溶解后，用PBS缓冲液稀释至终浓度2.0 mg/mL。

• 抗原乳液制备：按照1:1体积比将MOG (35-55)多肽溶液和FCA溶液加入两支5 mL玻璃注射器中，并通过三通连接两支注射器，在冰上反复推注40 min-2h，将抗原乳化至油包水状态，MOG (35-55)多肽浓度达到1.0 mg/mL。

• EAE造模：首先对麻醉后小鼠剃毛，在背部脊椎两侧皮下区域（避免刺入肌肉层）四点各注射50 μL乳液，共200μL（总量200 μg）。免疫当天（D0）和免疫后48小时（D2）各腹腔注射1次PTX，每次200 ng/只。

注意事项

• 警告：PTX具有多种生物学效应。避免吸入、摄入以及与皮肤和眼睛接触。穿戴适当的实验室服装，包括实验服、手套和护目镜。处理冻干粉时应在生物安全柜中进行，建议佩戴丁腈手套，避免产生粉尘和气溶胶。使用前，应轻柔摇晃，不要进行剧烈漩涡震荡，使悬液混合均匀。实验后残留PTX溶液及接触物品应按照生物危险品规范处理，避免环境污染。

• 严禁涡旋震荡或无菌过滤，以免蛋白损失。

• 热灭活的结核分枝杆菌刺激先天免疫反应，避免吸入、摄入以及与皮肤和眼睛接触。制备佐剂时严格避免针刺伤，因为它可能导致肉芽肿或诱发自身免疫反应。

• 多肽溶解后长期储存容易失效，并且会有冻融稳定性风险，建议现配现用。此外，多肽易吸附在离心管上，建议用低吸附离心管配制溶液。

常见问题解答

• Q1：造模后无明显症状是什么原因？
  A1：EAE模型诱导的成功率受多种因素的影响，包括小鼠的种类和性别、百日咳毒素的剂量、佐剂的使用以及丰富的实验基础和建模经验。此外，在特定应用中，每个批次都要确定最佳剂量。根据经验，造模后无明显症状最可能的原因是抗原与佐剂未充分乳化，判断是否乳化可参考说明书乳化质量严格验证排查原因。

• Q2：注射部位鼓包异常巨大或多个鼓包融合成一大片。
  A2：注射过浅（如误入皮内）会导致局部组织严重坏死，乳剂无法被有效递呈。应严格确保进行的是皮下注射，并在注射后观察是否形成了典型的水泡（通常直径几毫米），这是判断注射深度是否合适的最直观标志。

• Q3：注射点看不到任何局部反应。
  A3：注射过深（误入肌肉）无法有效地、持续地刺激局部的抗原递呈细胞和引流淋巴结。应严格确保进行的是皮下注射，并在注射后观察是否形成了典型的水泡（通常直径几毫米），这是判断注射深度是否合适的最直观标志。

• Q4：死亡率高
  A4：可能是PTX过量或感染，可降低PTX剂量，严格无菌操作。

• Q5：病理结果阴性
  A5：可能是取材时间过早，建议延至发病峰值（免疫后18-21天）。

• Q6：PTX复溶后呈浑浊状且未溶解，会影响实验结果吗？
  A6：这属于正常现象，产品可正常使用。使用百日咳毒素实现最佳效果的几点注意事项如下：严格按照产品说明书复溶百日咳毒素；用移液管将复溶后的百日咳毒素溶液轻轻吸入再排出（放回产品瓶中），进行混匀；混匀时吸出溶液时，沿瓶内壁轻轻移液，确保所有毒素从玻璃瓶内壁释放，因为蛋白质可能会吸附在玻璃表面；每次取样前，务必按上述方法轻轻混匀，确保每次都能获得均匀混悬液；请勿对百日咳毒素溶液进行涡旋振荡或超声处理；请勿对本产品进行无菌过滤，否则会导致蛋白质损失。

• Q7：有详细操作视频可以参考吗？
  A7：有的，请联系爱必信技术支持团队索取《EAE 造模操作指南》。

储存/保存方法

• 冻干粉于4°C可保存2年。复溶后请分装成单次使用小份，于4°C短期保存，并尽量在短期内（如一周内）使用完毕，以免活性下降。

运输方式

• 蓝冰运输