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快速内切酶DpnI

简要描述:快速内切酶DpnI最适反应温度下,将 1 μl DpnI 与 1 μg 超螺旋质粒DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。

  • 产品型号:abs60210
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-19
  • 访  问  量:100

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详细介绍

品牌自营品牌供货周期现货
应用领域化工,生物产业,能源
产品描述
描述
爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接"的体验。
识别位点:
5'...G Am6 C...3'
3'...C T↑ Am6G...5'
同裂酶:MalI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

快速内切酶DpnI产品组分:

名称规格
 DpnI50 μl
10× Cut Buffer1 ml
10× Cut Color Buffer1 ml
使用方法

1. 快速内切酶DpnIDNA 快速酶切流程:
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:


质粒 DNA基因组 DNA
ddH2O15 μl30 μl
10× Cut  Buffer 或 10× Cut  Color Buffer2 μl5 μl
底物 DNA2 μl (up to 1 μg)10 μl (5 μg) 
DpnI1 μl5 μl
Total20 μl50 μl
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 37℃温育 15 min(质粒),或 30~60 min(基因组 DNA);
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切:
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系:
DNA1 μg2 μg3μg4 μg5 μg
DpnI1 μl2μl3 μl4 μl5 μl
10× Cut  Buffer 或 10× Cut Color Buffer2 μl2 μl3 μl4 μl5 μl
Total20 μl20 μl30 μl40 μl50 μl
注:如果总反应体系大于 20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量:
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
11602215158787

甲基化修饰影响:
DamDcmCpGEcoKIEcoBI
不能切割Dam-DNA无影响无影响无影响序列可能重叠
剪切可能受影响

在不同反应缓冲液中的活性:

Cut BufferThermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart®
 Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性100%100%100%100%
储存/保存方法
-20℃,有效期2年。
技术指标
建议反应条件:
1× Cut  缓冲液;
37℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程"配制反应体系。
失活条件:
80℃温育 20 min。
质量控制:
功能活性检测:
最适反应温度下,在 20 μl 反应体系中,1 μl DpnI能够在 15 min 内完全消化 1 μg pUC19 DNA。
超长时间温育检测:
最适反应温度下,将 1 μl DpnI 与 1 μg pUC19 DNA共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
最适反应温度下,使用 1 μl DpnI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测:
最适反应温度下,将 1 μl DpnI 与 1 μg 超螺旋质粒DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究

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