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SfiI

简要描述:SfiI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有优良的活性,能够在 5~15 分钟内完成酶切。

  • 产品型号:abs60371
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-07-07
  • 访  问  量:1363

详细介绍

品牌absinCAS-
分子式-纯度-
分子量-货号abs60371
规格100T供货周期现货
主要用途-应用领域化工,生物产业,综合
产品描述
描述

SfiI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有优良的活性,能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性,支持一管化反应,提升“酶切 - 修饰 - 连接"的体验。CutOne Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与 10 bp双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。


识别位点:
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'


建议反应条件:
1× CutOne™ 缓冲液;
50℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程"配制反应体系。


失活条件:
不可热失活,请使用酚氯仿抽提或柱纯化。


产品组成:

组分规格
SfiI100 μl
10× CutOne Buffer1 ml
10× CutOne Color Buffer1 ml
使用方法
使用方法
1、DNA 快速酶切流程
(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
组分质粒 DNAPCR 产物基因组 DNA
ddH2O15ul16ul30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul3ula5ul
底物 DNA2ul (up to 1ug)10ul (~0.2ug)10ul (5ug)
SfiI1ul1ul5ul
Total20ul30ul50ul

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× Cutone Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行(2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
(3)50℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);
(4)酚氯仿抽提或柱纯化(可选);

(5) 如果使用 CutOne Color Buffer 进行酶切反应,得到的产物可以直接进行上样电泳。


2、双酶切或多酶切
(1)每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
(2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;

(3)如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。


3、适用于质粒的扩大反应体系
DNA1ug2ug3ug4ug5ug
SfiI1ul2ul3ul4ul5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul2ul3ul4ul5ul
Total20ul20ul30ul40ul50ul
不同 DNA 中的酶切位点数量
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
00000103

甲基化修饰影响

DamDcmCpGEcoKIEcoBI
无影响剪切受影响剪切受影响无影响无影响

在不同反应缓冲液中的活性


CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性100%100%100%100%
储存/保存方法
-20°C 及以下运输及保存,长期保存建议放 80°C 。有效期2年。
技术指标
质量控制:
功能活性检测:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中,1 μl SfiI 能够在 15 min 内消化 1 μg pEPE DNA。
超长时间温育检测:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中,将 1 μl SfiI 与 1 μg pEPE DNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
50℃下,使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物,回收酶切产物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。
非特异性内切酶活性检测:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中将 1 μl SfiI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究

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