SDS电泳缓冲液的配制细节直接影响蛋白条带的分离效果,做好母液稀释、SDS析出应对和除泡处理,就能避免多数电泳结果异常的问题。
母液稀释是配制的核心第一步,常规实验室多将缓冲液配制成高倍浓缩母液常温存放,使用前按比例加入去离子水混匀即可。稀释时要注意充分搅拌,避免局部离子浓度不均,建议现用现配,长期放置的稀释后工作液容易出现pH漂移,影响后续电泳迁移率的稳定性。
低温环境下浓缩母液中的SDS很容易析出,出现白色絮状沉淀,这是正常现象并非试剂变质。遇到析出情况无需重新配制,只需将母液容器置于温水浴中缓慢加热,期间轻轻摇晃容器,待絮状物溶解后再取出冷却至室温,确认成分恢复均匀后,再进行后续稀释操作,不会影响缓冲液的使用性能。
除泡操作是很多实验者容易忽略的细节,SDS作为表面活性剂,溶解和搅拌过程中很容易产生大量细密泡沫,直接定容会导致体积计量不准。配制时不要高速搅拌溶液,可选择温和的磁力搅拌加速溶解;如果已经产生泡沫,可静置片刻让大部分气泡自然上浮破裂,少量残留的细密泡沫,用移液枪头轻轻贴住液面吸出即可,不要用力冲击液面避免带入更多空气。
做好这三点小细节,就能配出状态稳定的电泳缓冲液,减少条带拖尾、迁移异常等常见电泳问题。