IBD 实验人速存！DSS 造模 + 机制研究全流程方案

做炎症性肠病（IBD）基础研究的小伙伴，是不是总被这些问题卡住：造模方案怎么定？表型评价用什么指标？机制研究从哪下手？试剂清单怎么列？

今天直接给你一套从上游造模到下游机制验证的完整 IBD 实验体系，DSS 溃疡性结肠炎、TNBS 克罗恩病双模型全覆盖，思路 + 试剂一步到位，课题申报、实验设计、论文写作直接套用！

一、整体实验逻辑：上游 - 中游 - 下游，闭环研究不踩坑

做 IBD 实验，核心就是「造模 - 评价 - 机制」三步走，逻辑清晰，层层递进：

• 上游：造模：构建急性 / 慢性肠炎模型（DSS/TNBS 双模型可选）

• 中游：表型评价：用 DAI 指数等指标明确疾病活动度，验证造模成功 + 药物疗效

• 下游：机制验证：从炎症、肠屏障、免疫、菌群四大维度，深挖作用靶点

二、上游：IBD 造模设计，三种经典模型直接照搬

1. 常用模型怎么选？

2. DSS 急性肠炎标准方案（直接用）

• 动物选择：6-8 周雌性小鼠（个体差异小，造模更稳定）

• 分组设计：正常对照组、模型组、药物低 / 中 / 高剂量组、阳性药组（5-ASA、地塞米松等）

• 造模流程：3%-5% DSS 水溶液自由饮用 5-7 天，之后改正常饮水，观察至 Day 10-14

• 每日监测：体重、便血、粪便性状、存活率，为 DAI 评分做准备

  

3. DSS 急性结肠炎类器官标准方案（直接用）

传代后的类器官，在day2-3，类器官雏形出现（囊泡出现），用含有20μg/mL DSS的类器官培养基连续处理120h，期间每2天换一次DSS的类器官培养基。

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文献支持

【1】Cancer Res.2026 Feb 9.doi: 10.1158/0008-5472.CAN-25-2586. IF:16.6
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三、中游：疾病活动度评价（DAI），造模成功金标准

疾病活动指数 DAI是 IBD 实验的核心评价指标，公式直接用：

DAI = 体重下降评分 + 便血评分 + 粪便性状评分

每项 0-4 分，总分 0-12 分，分数越高，炎症越严重

同时配套检测，多维度验证造模效果：

• 结肠长度：炎症越重，结肠缩短越明显

• 脾脏指数：脾脏增大提示全身炎症激活

• 存活率：直观反映造模严重程度与药物保护效果

结肠炎类器官验证

1、明场验证

每天记录Control（非炎症诱导组）和Modle（炎症诱导组）的类器官明场照片和视频。

视频显示：与Control相比，Modle类器官形态结构松散，膨大。

明场图显示：与Control相比，Modle类器官壁明显增厚。

2、HE染色

H＆E显示：与Control相比，Model类器官壁增厚，上皮排布紊乱，且存在一定程度增生和胞内囊泡结构。

3、类器官活死染

活死染显示：与Control相比，Model类器官活性有所减弱。

4、FITC葡聚糖荧光染色

FITC葡聚糖荧光染色：与Control相比，Model类器官通透性增强。

5、IL-6和TNF-α检测

IL-6和TNF-α检测显示：与Control相比，Model类器官通透性增强，Modle组ELISA检测IL-6显著升高，图 (A)；Modle组ELISA检测TNF-α显著升高，图 (B)。

总结：通过对Control（非炎症诱导组）和Modle（炎症诱导组）的指标对比，从明场验证、HE染色、类器官活死染、FITC葡聚糖荧光染色、IL-6和TNF-α检测等指标检测，可以验证Modle炎症诱导成功。

四、下游：机制实验全套设计，四大维度全覆盖

1. 组织病理：直观验证炎症损伤

• 结肠 HE 染色：评估炎性浸润、隐窝破坏、溃疡程度

• 结肠 AB-PAS 染色：观察黏液分泌、杯状细胞数量，反映肠黏膜屏障

• 免疫组化 / 免疫荧光：

• 肠屏障：ZO-1、Occludin 紧密连接蛋白

• 免疫细胞：CD4、F4/80、MPO 浸润情况

• 细胞增殖 / 凋亡：Ki67、TUNEL 染色

  

  

  

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文献支持

【1】AdvSci (Weinh).2024 Dec 24;12(7):2409537.doi:10.1002/advs..IF:17.5
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【6】Cel. 2025 Mar 3.doi:10.1016/j.cell.2025.02.002.IF:42.5

2. 炎症因子：核心炎症通路验证

• ELISA/CBA/ 多因子检测：TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、IL-10、IL-23

• qPCR：检测结肠组织炎症相关基因 mRNA 表达

3. 肠屏障功能：IBD 核心靶点研究

• 血清内毒素（LPS）：反映肠道通透性

• FD4 通透性实验：异硫氰酸荧光素 - 葡聚糖灌胃，检测肠道屏障完整性

• 紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin 蛋白表达检测

4. 氧化应激：炎症损伤的重要推手

• 氧化应激指标：MDA、SOD、GSH-Px、CAT 检测

• iNOS、ROS 相关指标：评估氧化损伤程度

5. 肠道菌群：IBD 发病的关键环境因素

• 16S rRNA 测序：分析肠道菌群组成与多样性

• 宏基因组 / 代谢组：深挖菌群功能与代谢产物

• 短链脂肪酸（SCFA）：乙酸、丙酸、丁酸检测，反映菌群代谢功能

6. 免疫细胞（流式）：免疫失衡机制验证

• 肠系膜淋巴结 MLNL、结肠固有层 LPMC 细胞分离

• 流式检测：Th1、Th17、Treg、巨噬细胞 M1/M2 比例，解析免疫调控机制

写在最后
这套方案覆盖了 IBD 基础研究的全流程设计，从造模到机制，从表型到分子，不管是做课题申报、实验设计还是论文写作，都能直接套用！再也不用到处查文献、凑方案，一套搞定 DSS/TNBS 双模型，炎症、屏障、免疫、菌群四大机制方向全涵盖，实验人直接抄作业！