小鼠皮肤组织-单细胞样本制备标准protocol

更新时间：2026-08-12 点击次数：26

一、实验前准备-全套试剂耗材

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组织样本处理-所用全套试剂耗材

二、样本取材及预处理

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1、对小鼠实施安乐，在皮毛线以上部位的基部截断耳部；

2、在无菌培养皿表面放置耳组织，使用镊子在组织上划线去除多余毛发，用弯头镊子将耳组织沿背腹方向切开，分成2部分-背侧和腹侧。

3、将皮肤组织（100mg）加入含有解离液200μL的5mL离心管中，用细剪将皮肤组织切成极小碎片，直至形成糊状物；

三、标准化组织解离步骤参考

1、组织消化解离

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(1) 向离心管中再加入1.8mL组织解离液，涡旋混匀后放入水平摇床中，37℃，120转/分钟，消化90分钟；

(2) 后向试管中加入40 μL的0.5MEDTA溶液（abs9133）终止消化，涡旋混合后继续孵育10分钟（37℃，120转/分钟）；

(3) 消化完成后取出离心管，将滤液和破碎组织通过无菌70 μm 细胞筛过滤至新的50mL离心管中，并使用5mL的1xPBS缓冲液（abs962）冲洗装过滤液的离心管并过滤，获得细胞悬液；

(4) 将细胞悬液在4℃条件下，400×g离心5分钟，弃去上清液。

(5) 使用适量1xPBS缓冲液（abs962）重悬细胞沉淀，可以用于后续分析。

四、流式结果展示

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小鼠皮肤组织单细胞悬液染色结果（abs50227）

实验所用试剂耗材

产品分类	产品编号	名称	规格
组织消化解离	abs50227	小鼠皮肤组织解离试剂盒	10T/25T
筛网	abs7232	70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤）	50个/箱
免疫细胞预富集	abs9102	percoll	100ml
10XPBS缓冲液	abs961	PBS缓冲液（10×）	500ml
1640培养基	abs9484	RPMI 1640培养基（含L-谷氨酰胺，不含HEPES）	500ml
红细胞裂解液（1×）	abs9101	RBC Lysis Buffer	100ml
阻断FCR非特异性染色	S0B0599	Mouse FcR Blocking Reagent	200T
染色缓冲液	abs9475	Flow cytometry staining buffer	500ml
死活染料	S0B88802	Fixable Viability Dye 545	150μg