单细胞样本制备—小鼠肠道固有层组织

更新时间：2026-08-03 点击次数：28

实验前准备

组织样本处理-所用全套试剂耗材

小鼠肠道固有层组织解离试剂盒组成：

组分	试剂名称	10T	25T	保存条件
abs50093-A	洗液1	100mL	250mL	4℃
abs50093-B	洗液2	200mL	500mL	4℃
abs50093-C	组织解离液	20mL	50mL	-20℃

样本取材及预处理

1、将小鼠颈椎脱臼处死之后，用75%的酒精对小鼠表面进行消毒，使用手术剪剪开小鼠腹部皮肤并暴露腹腔；

2、在小肠胃与十二指肠连接处剪开，一边分离小肠周围脂肪组织和肠系膜，一边拉出小肠，之后在小肠和盲肠连接处剪断，从而分离出小肠，将小肠放入装有10mL 1xPBS（abs962）的培养皿中；

（注：处死小鼠后应尽快取出小肠组织，以防小肠离体缺氧时间太长造成细胞活率下降；另外可以使用含有2% FBS的预冷1×PBS浸泡小肠）；

3、使用眼科剪剪去小肠表面的派氏结和去除表面所有的脂肪和肠系膜残余组织，再用剪刀纵向剪开小肠暴露内容物，并在培养皿中冲洗干净；（注：可以使用预冷的1×PBS缓冲液冲洗2-3遍小肠组织，以防残留的内容物影响后续解离效果和细胞活率）；

4、随后将小肠分成2cm左右的小段，转移至装有8mL 1×PBS（abs962）的15mL离心管中，手动剧烈上下颠倒离心管2min；
5、将上一步的获得的小肠组织转移至含有10mL 洗液1（abs50093-A）的50mL离心管中，37℃，220rpm震荡10min；
6、取出离心管手动上下颠倒混匀2min，后将组织取出转移至含有10mL PBS（abs962）的15mL离心管中，再次剧烈上下颠倒混匀2min；
7、取出上一步小肠组织转到含有10mL 洗液2（abs50093-B）的50mL离心管中，37℃，220 rpm 震荡10min；
8、取出离心管后上下颠倒混匀2min，重复步骤6-7；
9、取出离心管后上下颠倒混匀2min，然后将小肠组织转移至含有5mL 1640培养基（abs9484）的15mL离心管，上下颠倒混匀30s以去除上一步残留的洗液2；（注：在使用洗液1和洗液2后上下颠倒混匀时，颠倒混匀力度不要太剧烈，以防太过剧烈导致细胞活率降低）；

组织解离步骤

1、10、后将小肠组织（100mg）取出至于装有2mL的组织解离液（abs50093-C）的15mL离心管中，并剪成5cm左右的小段，在37℃培养箱中静置消化90min；（注：小肠不要剪的太碎，以防过碎导致过度消化细胞破碎，另外可以在消化过程中每隔半小时上下颠倒混匀离心管）；

2、消化结束后，取出离心管剧烈震荡3-5min，待组织破碎后，消化液和破碎组织经70um细胞筛过滤，并用5-10mL的1xPBS（abs962）清洗15mL离心管并过滤收集；
3、将收集得到的细胞滤液，400xg室温离心5min，弃去上清；
4、使用适量的的1xPBS（abs962）重悬细胞沉淀，得到的细胞悬液可用于后续实验操作。

流式结果展示

小鼠小肠组织单细胞悬液染色结果（abs50093）

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货号-规格	名称
abs50093-25T	小鼠肠道固有层组织解离试剂盒
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abs9101-100mL	红细胞裂解液（1×）
abs9102-100mL	细胞分离液
abs9475-500mL	细胞染色缓冲液
abs9484-500mL	RPMI 1640培养基（含L-谷氨酰胺，不含HEPES）
abs961-500mL	PBS缓冲液（10×）

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