IPS诱导胰岛类器官培养攻略

更新时间：2025-11-04 点击次数：62

一、实验准备

1、hPSC诱导分化胰岛类器官试剂盒（abs90131-1kit）

产品组成：

培养阶段	编号	名称	规格	保存
EB形成阶段	I01	EB 形成培养基	30mL	-20℃，12个月
EB形成阶段	I01-S	EB 形成补充剂	60uL	-20℃，6个月
定形内胚层(DE) 诱导阶段	I02	基础培养基1	50mL	-20℃，12个月
定形内胚层(DE) 诱导阶段	I02-A	补充剂A	250uL	-20℃，6个月
胰腺内胚层(PE) 诱导阶段	I03	基础培养基2	60mL	-20℃，12个月
胰腺内胚层(PE) 诱导阶段	I03-B	补充剂B	30uL	-20℃，6个月
内分泌祖细胞 (EP)诱导阶段	I04	基础培养基3	50mL	-20℃，12个月
内分泌祖细胞 (EP)诱导阶段	I04-C	补充剂C	650uL	-20℃，6个月
胰岛类器官成熟阶段	I05	基础培养基4	200mL	-20℃，12个月
胰岛类器官成熟阶段	I05-D	补充剂D	600uL	-20℃，6个月

2、辅助试剂

	货号	品名	规格	储存条件及周期
1	abs962	PBS	500mL	2~8℃或室温下保存，有效期12 个月。
2	abs9404	Advance 人多能干细胞培养基	100mL	-20℃保存，有效期2年。
3	abs9409	人多能干细胞消化液	100mL	-20℃保存，有效期2年。

3、实验耗材

	品名	货号	规格	储存条件及周期
1	细胞培养板（标准透明6孔板）	abs7033	1箱	室温，保质期3年。
2	超低吸附培养板（6孔板）	abs7056	1箱	室温，保质期3年。
3	1.5 mL离心管	abs7119	1箱	室温，保质期3年。
4	15 mL离心管	abs7120	1箱	室温，保质期3年。
5	50 mL离心管	abs7121	1箱	室温，保质期3年。
6	10mL一次性移液管	abs7053	1箱	室温，保质期3年。
7	50mL一次性移液管	abs7055	1箱	室温，保质期3年。
8	10uL吸头（盒装，无菌无酶）	abs7072	1箱	室温，保质期3年。
9	200uL吸头（盒装，无菌无酶）	abs7075	1箱	室温，保质期3年。

二、诱导流程图

三、试剂盒使用流程：

①EB 形成（2 天）

1、hPSC 于基质胶包被的标准透明6孔板的一个孔，加入2mLAdvance 人多能干细胞培养基，使细胞生长至 70-80%汇合度。

2、将孔中的培养基吸除。

3、在消化期间配置EB形成wan全培养基：取 11mL EB 形成培养基与 22μL EB 形成补充剂混匀获得 EB 形成wan全培养基，于一个新的超低吸附 6孔板的 3 个孔每孔加入 2mL EB 形成wan全培养基，准备后续使用。

4、向孔中加入 1mL PBS（无钙镁离子）洗，吸去。

5、向孔中加入 1mL accutase，37℃消化 3min。

6、当看到克隆发白发亮，轻轻拍打板侧（每侧拍两下），把细胞拍下来，再在生物安全柜中，加入 1mL EB 形成wan全培养基终止消化，把这 2mL 体系吸入装有 3mL EB 形成wan全培养基的15mL 离心管离心 160g 5min，吸弃上清至剩余几十微升，轻弹管底 3-4 下，让细胞沉淀溶于上清。

7、往管里加 1mL EB 形成wan全培养基，轻弹 3-4 下，混匀即可，把这1mL细胞悬液平均悬空加入提前准备的超低吸附 6孔板3 个孔中，37℃、5%CO₂过夜。

8、第二天（D-1）镜下观察可以看到形成大量、均一的 EB，半数换液，补充 50%EB 形成培养基（不含补充剂），置于水平摇床培养。（注意：所用培养基均应提前在工作台放置 30min以恢复室温，后面操作同理。）

②DE 诱导（5 天）

9、D0，解冻补充剂 A，将基础培养基 1 与补充剂 A 混匀，作为 DE 诱导培养基，恢复室温。

10、吸出孔中 EB 形成培养基，注意不要将 EB 吸出。

11、每孔加入 2mL DE 诱导培养基，放入 37℃，5%CO₂的培养箱继续培养。

12、每天更换 DE 诱导培养基，持续 5 天。

③PE 诱导（6天）

13、D5，解冻补充剂 B，将基础培养基 2 与补充剂 B 混匀，作为 PE 诱导培养基。每孔每天更换 2mL PE 诱导培养基，操作如 9、10，持续 6 天。

④EP 诱导（5天）

14、D11，解冻补充剂 C，将基础培养基 3 与补充剂 C 混匀，作为 EP 诱导培养基。每孔每天更换 2mL EP 诱导培养基，操作如 9、10，持续 5 天。

⑤胰岛类器官成熟阶段（以20天为例）

15、D16，解冻补充剂D，将基础培养基4与补充剂D混匀，作为胰岛类器官成熟培养基。每孔每天更换2mL成熟培养基，操作如 9、10，持续20天。

本期小爱推荐

货号	品名	规格	储存条件及周期
abs90131	hPSC诱导分化胰岛类器官试剂盒	kit	-20℃保存，基础培养基有效期12个月，补充剂有效期6个月。
abs9404	Advance 人多能干细胞培养基	100mL	-20℃保存，有效期2年。
abs9409	人多能干细胞消化液	100mL	-20℃保存，有效期2年。
abs962	PBS	500mL	2~8℃或室温下保存，有效期12 个月。
abs7033	细胞培养板（标准透明6孔板）	1箱	室温，保质期3年。
abs7056	超低吸附培养板（6孔板）	1箱	室温，保质期3年。
abs7119	1.5 mL离心管	1箱	室温，保质期3年。
abs7120	15 mL离心管	1箱	室温，保质期3年。
abs7121	50 mL离心管	1箱	室温，保质期3年。
abs7053	10mL一次性移液管	1箱	室温，保质期3年。
abs7055	50mL一次性移液管	1箱	室温，保质期3年。
abs7072	10uL吸头（盒装，无菌无酶）	1箱	室温，保质期3年。
abs7075	200uL吸头（盒装，无菌无酶）	1箱	室温，保质期3年。

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