DAPI染色液的核心作用原理是与DNA双螺旋的AT碱基对特异性结合,结合后被激发产生蓝色荧光,从而实现对细胞核或染色体的定位与观察。
1.核心结合机制
DAPI是一种具有荧光特性的小分子化合物,其分子结构能嵌入到DNA双螺旋结构中AT碱基对之间的小沟区域。
这种结合具有高度特异性,仅与DNA结合,不与RNA或其他细胞成分发生有效结合,确保染色信号的准确性。
2.荧光激发与信号产生
未结合DNA时,DAPI的荧光信号非常微弱。
一旦与DNA结合,其分子构型发生改变,荧光量子产率显著提升。
在紫外光(通常为350370nm)激发下,结合后的DAPI会发射出蓝色荧光(发射波长约450470nm),可通过荧光显微镜直接观察到。
3.主要功能导向
细胞核定位:由于DNA主要存在于细胞核内,DAPI染色后可清晰显示细胞核的形态、数量及分布,常用于细胞计数或判断细胞凋亡(凋亡细胞会出现核固缩、碎裂等特征)。
DNA含量分析:荧光强度与结合的DNA量正相关,可通过流式细胞术检测荧光信号,分析细胞周期各阶段(G1、S、G2/M期)的DNA含量变化。