虽然液相蛋白定量检测的技术很多,但是大多数的技术仅能对样本进行单一指标的检测,同时检测多个指标时则需要提供大量的样本分批检测,操作繁琐,且各指标间差异性较大。对于样本量较少或需要对比各指标的用户,传统的技术无法满足需要。再者日常实验中,常需对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测,如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析,由于这些因子的含量较少,低于一般常规方法的检测下限,使用常规的蛋白检测方法Western Blot等很难检测。爱必信提供CBA法多因子检测试剂盒,提供了更加灵活、简便、高效的微量样本多重检测方案。
原理:
将特定的抗体偶联到特定的具有不同荧光强度的微球表面,制备成为待测因子的捕获微球(Capture Antibody)。将捕获微球与待测样本(血清、血浆或者细胞培养液)进行孵育,此时待测的细胞因子被特定的微球捕获。生物素标记的检测抗体,形成抗体包被微球-细胞因子-检测抗体的免疫复合物,加入藻红蛋白标记的链霉亲和素与生物素结合,通过流式细胞仪检测,获得待测物的荧光强度,荧光强度与样本中因子的含量成正比,最后结合这十二种细胞因子标准品的标准曲线,从而实现对同一份样本中多个因子的定量检测,辅助判断机体的免疫功能状态。
不同指标检测灵敏度:
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注:若检测结果超出检测范围,应用标准品/样品/微球稀释液将样本稀释适当的倍数重新检测;若待测样本的检测结果低于检测下限或未检测到,建议直接报告为≤检测值。
模版建立方法:
1、微球群分布:
特异性 | 微球位置 | 微球所属区域 |
human TNF-α | L1 | R1 |
human IFN-γ | L2 | R1 |
human IL-2 | L3 | R1 |
human IL-4 | L4 | R1 |
human IL-6 | L5 | R1 |
human IL-10 | L6 | R2 |
human IL-12P70 | L7 | R2 |
human IL-1β | L8 | R2 |
human IL-8 | L9 | R2 |
human IL-17 | L10 | R2 |
human IFN-α | L11 | R3 |
human IL-5 | L12 | R3 |
注:微球内部用不同强度的荧光染料染色。
2、模板建立:模板建立可参考:
(1)建立X轴为FSC-H,Y轴为FSC-A的密度图模板,设定门,不包含碎片和黏连的微球,如下图1,P6;
(2)建立X轴为FSC-H、Y轴为SSC-H的线性密度图模板,设定混合微球位置R1,R2,R3,如下图2;
(3)建议两个PE(X轴)和APC(Y轴)的对数密度图模板,分别显示R1门,R2门,R3门内微球,使得微球群能够清楚和明显的分布于散点图上,显示各因子PE荧光强度。如图3,图4,图5。
3、样品的检测结果分析
各标准品及样本依次上机检测,对于每种微球群,应最少获取100个微球。利用标准品梯度作标曲,计算样本检测结果。
CBA应用领域:
炎症因子的水平的分析
肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测
系统性红斑狼疮(SLE)和新生儿脓血症等免疫疾病的监控
干细胞研究和干细胞治疗监测
免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控
感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价
免疫功能监测
药效评价,药物研发、疫苗研究
CBA与传统的蛋白定量相比有以下优势:
1、微量检测: 一个样本同时检测多个因子,只需25ul。
2、数据更可靠: 多指标来源于同一样本
3、检测速度快:多因子同时检测,无需过夜孵育。
4、灵敏度高:低至1.22pg/mL。
Absin CBA盒子优点:
1、性能好:采用Biotin-SAV信号放大系统,灵敏度更高。
2、磁性微球: 搭配磁标板,操作简单。
3、适用广:与多种流式细胞仪兼容。
4、易分析:免费提供FCAP v3.0分析软件。
5、指标灵活:检测指标可灵活组合。
可自由组合的多因子检测Kit:
Absin现有Kit
货号 | 产品名称 | 规格 |
abs50187 | 小鼠十一项细胞因子检测试剂盒(流式荧光发光法) | 48T/96T |
abs50186 | 人十二项细胞因子检测试剂盒(流式荧光发光法) | 48T/96T |
配套耗材
货号 | 产品名称 | 规格 |
abs7985 | 96孔磁标板 | 1个 |
在试剂盒现有指标的基础上,可以选择个别指标进行组合,形成更少指标的盒子(比如四项或者五项细胞因子)但是human和mouse指标不通用。可联系业务人员咨询组合Kit价格和货期。
Human指标 | Mouse指标 |
human TNF-α | mouse TNF-α |
human IFN-γ | mouse IFN-r |
human IL-4 | mouse IL-4 |
human IL-6 | mouse IL-6 |
human IL-5 | mouse IL-5 |
human IL-10 | mouse IL-10 |
human IL-12P70 | mouse IL-12P70 |
human IL-1β | mouse IL-1β |
human IL-17 | mouse IL-17A |
human IL-2 | mouse MCP-1 |
human IL-8 | mouse GM-CSF |
human IFN-α |
Absin文献奖励重磅升级!
Absin产品线:
爆款产品:试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测);细胞培养(类器官试剂盒+基质胶,胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒;分子(mRNA合成服务+提取试剂盒);化合物大包装;辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
特色产品:鸡胚提取物CEE、B27、N2、霍乱毒素B亚单位CTB、牛脑垂体提取物BPE、百日咳毒素PTX、重组人胰岛素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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