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抗体亲和纯化填料解决方案

更新时间:2025-02-14      点击次数:353

一、背景介绍

 

◆ 蛋白A是⾦⻩⾊葡萄球菌的细胞壁中的表⾯蛋⽩,它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成;

◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的⼀种蛋⽩质;

◆ 蛋白A/G是重组蛋⽩A蛋⽩G融合蛋⽩,融合了来⾃蛋⽩A的5个Fc结合域和蛋⽩G的3个Fc结合域;

◆ 蛋白L来源于⼤消化链球菌,并通过L链相互作⽤与免疫球蛋⽩结合。

 

图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域

 

表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析


 

蛋白A

蛋白G

蛋白A/G

蛋白L

优点

结合位点在CH2和CH3结构域之间的Fc区域,以及⼈ VH3家族的Fab区内的重链

 

可以特异性地同免疫球蛋⽩IgG分⼦的Fc段结合⽽不影响其Fab段与抗原分⼦结合的能⼒

可以与⼈的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合。蛋⽩A/G降低了对pH的依赖,允许在pH 5-8进⾏结合

只与抗体的κ轻链结合⽽不会影响抗体的抗原结合位点。可以结合更⼴泛的抗体类别,如⼈类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD,以及含κ轻链(⼈类1,3,4型,⼩⿏1型)的Fab、scFv等抗体⽚段

缺点

 

 

不能与⼩⿏的IgA、IgM和⾎清⽩蛋⽩结合

不结合⽜、⼭⽺或绵⽺来源的免疫球蛋⽩

应用

免疫球蛋⽩的纯化、固定或检测领域

从⾎清中分离并纯化或去除IgG、单克隆抗体的纯化和抗原抗体复合物的分离等

⿏IgG单抗的提取和检测

从添加BSA或FCS的培养液中纯化单克隆抗体,也⼴泛⽤于基因改造⼯程化抗体的纯化分离



 

表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒


种类

亚型

蛋白A

蛋白G

蛋白A/G

蛋白L

IgG1

+++

+++

+++

+++

IgG2

+++

+++

+++

+++

IgG3

+

+++

+++

+++

IgG4

+++

+++

+++

+++

IgM

+

-

+

+++

IgD

-

-

-

+++

IgA

+

-

+

+++

Fab

+

+

+

+++

小鼠

IgG1

+

++

++

+++

IgG2a

+++

+++

+++

+++

IgG2b

+++

+++

+++

+++

IgG3

+++

+++

+++

+++

IgM

-

-

-

+++

大鼠

IgG1

+

++

++

+++

IgG2a

-

+++

+++

+++

IgG2b

-

+

+

+++

IgG2c

+++

+++

+++

+++

IgG1

+

+++

+++

-

IgG2

+++

+++

+++

-

山羊

IgG1

+

+++

+++

-

IgG2

+++

+++

+++

-

IgG(ab)

+

-

+

NA

IgG(c)

+

-

+

NA

IgG(T)

-

+++

+++

NA

IgG

+++

+++

+++

+

IgG

+++

+

+++

+++

IgG

+++

+

+++

NA

IgY

-

-

-

-




注:- 表示不包含;+ 表示中标组合;+++ 表示错误组合;NA 表示不适用或数据不可用。

 

二、抗体亲和纯化填料参数

 


类别

重组蛋白A琼脂糖凝胶FF

重组蛋白G琼脂糖凝胶FF

重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

蛋白A/G琼脂糖凝胶FF

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

基质

4%交联琼脂糖

4%交联琼脂糖

4%交联琼脂糖

4%交联琼脂糖

4%交联琼脂糖

配基

重组金黄色葡萄球菌蛋白A,≥6mg/mL 

重组链球菌蛋白G,≥6mg/mL,单点偶联

重组耐碱蛋白A,≥6mg/mL

蛋白A蛋白G融合蛋白,≥6mg/mL

重组大消化链球菌蛋白L,≥6 mg/mL

粒径范围a

45-165μm

平均粒径

~90μm

动态结合载量b

≥40mg h-IgG/mL

≥40mg h-IgG/mL

≥45mg h-IgG/mL

≥40mg h-IgG/mL

≥40mg k轻链h-IgG/mL

推荐工作流速c

60-300cm/h

60-300cm/h

60-300cm/h

60-150cm/h

60-300cm/h

最大流速与压力d

>900cm/h

使用 pH

3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)

3-9(推荐的工作pH),2-10(短期稳定)

3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)

3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定)

2-9(推荐的工作pH),15mM NaOH(CIP)

化学稳定性

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6 mol/L盐酸胍、70%乙醇等。

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70% 乙醇。




 

注:

a:90%体积以上的微球在此粒径范围;

b:DBC10%测试条件为:10%流穿,6min停留时间;

c:推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件,并非只能在该流速范围内工作;

d:10cm柱高下的最大测试流速。

 

三、应用数据

 

图2 工艺溶剂稳定性

 

图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性

 

图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线,样品为h-IgG

 

图5 填料:重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)(Cat: abs91003-M);

样品:牛血清,相对于填料约20mg IgG/mL填料;

上样、结合缓冲液: 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV;

洗脱缓冲液:100mM甘氨酸,pH3.0,14CV;

在位清洗(CIP):100mM NaOH,10CV

 

四、爱必信抗体亲和纯化填料产品信息

 


货号

产品名称

规格

abs91001-F

重组蛋白A琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91001-G

重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL

abs91001-M

重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91002-F

重组蛋白G琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91002-G

重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL

abs91002-M

重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91003-F

重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91003-M

重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91003-G

重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL

abs91004-F

蛋白A/G琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91004-M

蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91004-G

蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL

abs91005-F

易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91005-M

易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91005-G

易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL

abs91006-F

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

10mL/100mL

abs91006-M

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)

1mL/5mL

abs91006-G

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(重力预装柱)

1mL/5mL




 

参考文献

[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.

 

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