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脂质染色 | 脂滴&胆固醇染色技术全攻略

更新时间:2024-07-08      点击次数:97

脂质是一类广泛存在于生物体中的有机分子,它们在细胞的结构和功能中扮演着重要角色。脂滴和胆固醇是脂质的不同形式,它们在结构和功能上有所不同。脂滴是中性脂的主要贮存场所,包括脂酰甘油和酯化胆固醇。在病理情况下,如器官发生脂肪变性,细胞内可能出现脂滴增多,通过脂肪染色能将这些脂滴清晰的显现出来。胆固醇是真核细胞细胞膜的重要成分,能够维持膜结构完整性,调节膜流动性,参与信号转导,在动脉硬化、C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C, NPC)、阿尔茨海默病等疾病的发生发展过程中起着重要作用。


脂滴和胆固醇的染色是病理学和细胞生物学研究中的重要技术,用于观察和量化细胞内脂质的积累。目前,脂滴染色使用zui广泛的染料包括油红O(Oil Red O)、尼罗红(Nile Red)、苏丹染料(Sudan Dyes)等。胆固醇染色使用最多的染料是菲律平(Filipin III)Filipin已被广泛应用30余年它可用于标记生物膜结构上及非细胞结构内的自由胆固醇,也能配合应用胆固醇酯化酶,使胆固醇酯水解成自由胆固醇而间接显色。


接下来,小爱就给大家详细介绍脂滴和胆固醇的染色方法。


一、脂滴染色


1、组织切片脂滴油红O(abs42024259)染色


1)实验原理


油红O属于偶氮染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类,它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置入染液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈橘红色。


2)染色步骤[1]


① 油红O染色液配制:

a.母液准备:称取1g油红O,加入100mL异内醇配置成储存液,棕色瓶4℃密封保存。

b.工作液准备:使用前加双蒸水稀释至60%,滤纸过滤后使用。

② 用冰冻切片机切取5μm厚的肝组织切片;

③ 用95%乙醇固定,蒸馏水清洗1min,60%异丙醇浸泡30min;

④ 再用60%油红O染色溶液处理10min和15min,蒸馏水冲洗1min;

⑤ 苏木素复染,用自来水清洗1~3min,光镜下观察肝细胞脂质沉积情况。


3)肝组织油红O染色结果图:


脂质染色 | 脂滴&胆固醇染色技术全攻略

(注:图片来源于文献[1])


2、细胞脂滴尼罗红(abs9114)染色(以下染色方法仅供参考)


1)实验原理


尼罗红是一种亲脂性荧光染色剂,它是一类环境敏感性荧光染料,能够在富含脂质的环境中产生强烈的荧光,而在水性介质中的荧光强度极小,这种特性使得它成为了一款极重要检测细胞内脂滴的荧光指示剂,可以通过荧光显微镜和流式细胞检测结果。


2)染色步骤


① 尼罗红染色液配制:

a.母液准备:取适量的尼罗红(Mw:318.37g/mol)用无水DMSO充分溶解制备1mM储存液,按照单次用量分装冻存,避免反复冻融,避光保存。

b.工作液准备:用HHBS或生理缓冲液(pH 7.0)将母液按1:1000稀释为1×尼罗红工作液,漩涡混匀。

【注意】:

尼罗红的实际染色浓度请参考文献或实验室体系来调整。以上只做参考。

② 用检测化合物处理细胞一段时间;

③ 离心并调整细胞浓度为1-5×105cell/管;

④ 用500µL尼罗红工作液重悬细胞;

⑤ 室温或37ºC避光孵育5-10min;

⑥ 吸掉染色工作液,用HHBS或适当缓冲液清洗细胞;

⑦ 用500µL预热的HHBS或培养基重悬细胞,使细胞密度为1-5×105cell/管;

⑧ 荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号,Ex/Em=552/636nm。

【注意】:

① 对于贴壁细胞,可用HHBS或适当缓冲液清洗细胞,然后直接加入尼罗红工作液孵育;

② 细胞也可预固定,然后用尼罗红工作液染色。


二、胆固醇染色

细胞胆固醇菲律平(Filipin III, abs42018484)染色


1)实验原理


菲律平的主要成分是Filipin III,它可以特异性地与游离胆固醇相互作用,而不与酯化的胆固醇结合。这种特异性结合是由于菲律平分子结构中包含多个共轭双键,使其能够与胆固醇分子的疏水部分形成复合物。当Filipin III与游离胆固醇结合后,其激发光谱波峰约在360nm处,发射光谱波峰约在480nm处。通过检测这些特定波长附近的荧光信号,可以表征细胞内的胆固醇含量。


2)染色步骤[2]


① 菲律平染色液配制:

a.母液准备:1mg菲律平粉末中加入1mL DMSO,完quan溶解配置成1mg/mL储存液,按照单次用量分装冻存,避免反复冻融,避光保存。

b.工作液准备:使用前,取适量母液加入到PBS中,稀释成一定浓度的工作液(如0.1mg/mL)备用。

② 将细胞接种于盖玻片中,培养12-18h;

③ 用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次后,在室温下用4%多聚甲醛固定20min;

④ 室温下用0.1mg/mL菲律平III处理细胞30min;

⑤ 细胞再用0.35μg/mL碘化丙啶(PI)染色5min;

⑥ 最后,用共聚焦激光扫描显微镜在405nm处检测菲律平和PI染色的荧光强度。


3)星形胶质细胞/神经元细胞菲律平染色结果图


脂质染色 | 脂滴&胆固醇染色技术全攻略

脂质染色 | 脂滴&胆固醇染色技术全攻略

(注:图片来源于文献[2])


爱必信(上海)生物科技有限公司可为科研人员提供非常全面的细胞结构(如细胞膜、细胞质、细胞核、细胞骨架、线粒体、溶酶体、外泌体、内质网等)染色相关染料。关于脂质染色,小爱今天就介绍到这里。下期小爱将为大家介绍外泌体的标记技术,感兴趣的老师记得关注我们呦!



参考文献


[1] Ji X, Ma Q, Wang X, et al. Digeda-4 decoction and its disassembled prescriptions improve dyslipidemia and apoptosis by regulating AMPK/SIRT1 pathway on tyloxapol-induced nonalcoholic fatty liver disease in mice[J]. J Ethnopharmacol. 2023;317:116827.

[2] Huang Y, Zhang W, Guo X, et al. Cellular cholesterol loss by DHCR24 knockdown leads to Aβ production by changing APP intracellular localization[J]. J Lipid Res. 2023;64(5):100367.


脂质染色产品推荐:


货号

产品名称

λEx/λEm (nm)

产品描述

abs42018484

菲律平

360/480

测定未酯化胆固醇水平。

abs42024259

油红O

628/684

细胞脂滴染色;组织切片脂质染色。

abs42027851

苏丹Ⅳ

255/355

对组织切片脂类、甘油三酯、脂蛋白染色。

abs9114

尼罗红

552/636

测定细胞内的脂肪滴。

abs9214

苏木素染液

组织学中用于细胞核的染色。

abs9358

PI染色液(红色)

535/617

细胞核染色,胆固醇染色中常与菲律平搭配使用。





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货号

产品名称

λEx/λEm (nm)

产品描述

abs45153674

DiO 高氯酸盐(绿色)

484/501

活细胞示踪、细胞膜染色

abs47048165

DiD 对氯苯磺酸盐(红色)

644/663

活细胞示踪、细胞膜染色

abs80001

霍乱毒素B亚单位(CTB)

神经示踪剂

abs80003

霍乱毒素B亚单位-FITC

494/520

神经示踪剂

abs45153692

DiR 碘化物(深红色)

748/780

动物活体成像

abs42075819

D-荧光素钾盐

动物活体成像

abs47048270

罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)

540/565

细胞骨架染色(F-action)

abs47048271

鬼笔环肽-Fluor 488(绿色)

493/517

细胞骨架染色(F-action)

abs47048272

鬼笔环肽-Fluor 555(橙红)

556/574

细胞骨架染色(F-action)

abs47014944

钙黄绿素红(红色)

560/574

细胞质染色

abs9106

CFSE(绿色)

492/517

细胞质染色

abs42006041

DASPEI

550/573

线粒体染色

abs9103

JC-1

585/590

线粒体膜电位检测

abs47038870

溶酶体绿色荧光探针

504/511

溶酶体染色

abs47038871

溶酶体红色荧光探针

577/590

溶酶体染色

abs9819

PKH26红色荧光细胞连接试剂盒

551/567

外泌体染色

abs9820

PKH67绿色荧光细胞连接试剂盒

490/502

外泌体染色

abs47038874

内质网绿色荧光探针

489/520

内质网染色

abs47038875

内质网红色荧光探针

587/615

内质网染色

abs47047616  

DAPI染色液(蓝色)

364/454

细胞核染色

abs813337

Hoechst 33342(蓝色)

350/461

细胞核染色

abs9104

7-AAD(红色)

545/650

细胞核染色

abs9358

PI染色液(红色)

535/617

细胞核染色

abs45153639

Fluo 3-AM

506/526

钙离子(Ca2+)探针

abs42197174

DCFH-DA

502/523

活性氧(ROS)探针

abs42016243

DAF-2 DA

491/513

一氧化氮(NO)探针

abs47044989

WSP-1

465/515

硫化氢(H2S)探针





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