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超超超详细的组化二抗试剂盒说明书(解析版)

更新时间:2024-02-18      点击次数:377

概念

 

免疫组化,免疫组织化学技术 (immunohistochemistry) ,是利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术。

 

爱必信组化二抗试剂盒优点



图 abs957即用型高效免疫组化二抗试剂盒

 

1、基于聚合物技术+一抗放大剂,高敏感性,一抗可再稀释2-4倍!
2、非生物素检测系统,更低背景!
3、快速便捷,更短孵育时间!
4、abs957单品文献90+,认可度高!用的放心!

 

组分

 


组分编号

组分名称

规格

数量

A

过氧化氢

5mL

1

B

超级封闭液

5mL

1

C

一抗放大剂

5mL

1

D

酶标二抗聚合物

5mL

1

E

DAB A液

5mL

1

F

DAB B液

160uL

1




 

额外准备一抗(来源于小鼠或兔子)、PBS 。

该试剂盒组分可用于50张片子,适用于一抗来源为小鼠和兔子的样本(注意,不是样本来源),DAB显色。

 

实验前准备



图 样本处理

 

1、取出固定好的样本,流水冲洗3次,每次5min;

2、脱水、透明、浸蜡处理

75%乙醇(1h)——85%乙醇(1h)——95%乙醇(1h)——100%乙醇(50min)——100%乙醇(50min)——100%乙醇(50min)——二甲苯(40min)——二甲苯(40min)——二甲苯(40min)——63℃石蜡(50min)——63℃石蜡(50min)——63℃石蜡(50min)。

3、包埋处理

脱水结束后放入预热的包埋机,按要求确定包埋方向进行包埋;

4、玻片做好编号标记;

5、切片:按照切片要求制备切片,切片厚度一般为3-5um;

6、摊片:用毛笔轻托放在46度水浴中摊片;

7、捞片、烤片:切片上组织充分展开后捞片,后置入60℃烘箱内进行烤片((烤片时间视组织类型而定,一般组织30min即可,骨组织等要延长时间至1h)),之后便可以进行脱蜡。

 

操作步骤



图 免疫组化实验流程

 

说明:所有的步骤在室温下操作,加试剂可以直接滴瓶滴定,也可以用移液器,一滴=30-40uL。

 

1、脱蜡、水化组织切片二甲苯(5min)——二甲苯(5min)——二甲苯(5min)——100%乙醇(5min)——100%乙醇(5min)——95%乙醇(3min)——85%乙醇(3min)——75%乙醇(3min)——去离子水(5min)

2、PBS洗2-3次各5min;

3、抗原修复:根据所应用的一抗的特殊要求,对组织切片进行预处理;(抗原修复:将脱蜡好的切片置入抗原修复液(根据一抗说明书要求选择用柠檬酸钠或者EDTA),在高压锅内进行高温抗原修复,高压锅加热至饱压,然后继续加热5min,关闭电源,10min后取出染色盒,室温冷却30min或者使用微波修复,将抗原修复完的切片组织周围擦干,用组化笔画上阻水圈)

4、PBS洗2-3次各5min;

5、内源性的过氧化物酶封闭:加入100uL A 液孵育10min,阻断内源性过氧化物酶,以减少非特异性背景染色;

6、PBS洗2-3次各5min;

7、血清封闭:加入100uL B 液孵育5min来减少非特异性染色。注意:此步骤不要超过10min;如果一抗在含有5%至10%正常山羊血清的缓冲液中稀释,则此步骤可以省略。

8、PBS洗2-3次各5min;

9、一抗孵育:加一抗,室温或37℃孵育20min,用量以浸没样本区域为准,可灵活调节;

10、PBS洗2-3次各5min;

11、一抗放大剂孵育:加入100uL C 液孵育10min;

12、PBS洗2-3次各5min;

13、二抗孵育:加入100uL D 液室温或37℃孵育10min。注意:此液对光敏感,注意避光。

14、PBS洗2-3次各5min;

15、DAB试剂配制:配制新鲜底物液:将30uL的F液和1mL的E液充分混合,即配制成新鲜底物液(该底物液可存放2周)。

16、DAB显色:加入100uL新鲜底物液, 孵育5min。注意:DAB显色时间需要镜下控制,选择最佳显色时间,做好防护。

17、终止显色:去离子水冲洗;

18、复染:苏木素复染3min左右、自来水冲洗,1%盐酸酒精中分化1s,自来水冲洗;

19、脱水透明:80%、95%、100%、100%酒精,每步5min、二甲苯5min、两次;

20、中性树胶封片 盖住玻片时从一端倾斜45°,小心不要产生气泡。

 

免疫组化产品推荐


货号

产品名称

规格

abs957

即用型高效免疫组化二抗试剂盒

5mL

abs996

即用型免疫组化二抗试剂盒(鼠兔通用型)

100mL

abs998

即用型免疫组化二抗试剂盒(抗兔)

100mL

abs997

即用型免疫组化二抗试剂盒(抗小鼠)

100mL

abs9792

组化双染试剂盒

50T

abs929

免疫组化笔

1支

abs9785

免疫组化笔plus

1支

abs9179

4%多聚甲醛(通用型组织固定液)

500mL

abs9756

OCT包埋剂

110mL

abs9342

Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)

100mL

abs9248

柠檬酸钠抗原修复液(50×)

100mL

abs9299

一抗二抗稀释液

100mL

abs9214

苏木素染液

100mL




 

好消息!Absin文献奖励重磅升级!

 


Absin特色产品线:

WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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