mRNA疫苗研究明星爆品——牛痘病毒加帽酶
更新时间：2021-12-10 点击次数：1134
真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对 mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤 甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能显著提高体外转录的RNA的稳定性和翻译能力。的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
产品特点：
本产品在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，效率可达到100%，并且保证加帽方向正确。
质量保证：
1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；
2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；
3、光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。
产品用途：
1、可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应；
2、可应用于mRNA的5’末端标记反应。
纯度验证
RNA酶残留定量检测
| RFU值 | RFU平均值 | CV% | Ratio |
| VCE A | 28469 28580 | 28524.5 | 0.2752 | 1.76 |
| VCE B | 79995 78605 | 79300 | 1.2394 | 4.88 |
| VCE absin | 17845 17906 | 17875.5 | 0.2413 | 1.1 |
应用实例
【加帽反应】
适用于10µgRNA (>I00nt)的加用反应，反应体系20µL,且可根据实际需要放大。
1.取10µgRNA,用 RNase free water将适量 RNA稀释 至15µL；
2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分；
4.37℃反应30 min.
5.RNA加帽完成，可进行后续实验.
| 组分 | 体积 |
| Denatured RNA | 15µL |
| 10x Capping Reaction Buffer | 2µL |
| GTP(l0 mM) | 1µL |
| SAM (2 mM) | 1µL |
| Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL) | 1µL |
| Total volume | 20µL |
应用实例
【5′末端标记反应】
本步骤适用于5′末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与 GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1.用RNase Free Water将适量RNA稀释至 14µL；
2.将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min；
3.按照表格依次加入各组分：
4.37℃孵育30 min；
5.RNA5′端标记完成，可进行后续实验。
*注：GTPMix为GTP和少量标记物，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。
| 组分 | 体积 |
| Denatured RNA | 14 µL |
| IOx Capping Reaction Buffer | 2µL |
| GTP Mix | 2µL |
| SAM (2 mM) | 1µL |
| Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL) | 1µL |
| Total volume | 20µL |
产品信息
| 货号 | 名称 | 规格 |
| abs60152 | 牛痘病毒加帽酶 | 500U/2000U/10000U |
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Absin特色产品线(全部现货)：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... |
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